- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0095
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
165
- 英文名：
PSH65
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：PSH65
形式：质粒干粉
参考用途：pSH65酿酒酵母基因敲除质粒
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，8138bp）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验与辅助质粒进行比较(Samulski等，1989)。pCDMrep质粒含有AAVrep基因，受CMV早期启动子的调控(Yang和Trempe，1993)。 19193bp的辅助质粒，pSH3和pSH5可以通过几个步骤来构建。一个1.5kb含有VAI和VAII基因的HindIII到SalI的片段(来自Ad5的nt9831-11555)被插入到pGEM3Z的同一位点产生pVA3。将一个5.8kb含有E2a基因的BamHI和EcoRI的片段(来自Ad的nt21563-27331)插入到pVA3的同样位
b半乳糖苷酶基因的两侧。PAAV/Ad质粒被用来作为一个包装质粒与辅助质粒进行比较(Samulski等，1989)。pCDMrep质粒含有AAVrep基因，受CMV早期启动子的调控(Yang和Trempe，1993)。19193bp的辅助质粒，pSH3和pSH5可以通过几个步骤来构建。一个1.5kb含有VAI和VAII基因的HindIII到SalI的片段(来自Ad5的nt9831-11555)被插入到pGEM3Z的同一位点产生pVA3。将一个5.8kb含有E2a基因的BamHI和EcoRI的片段
，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板
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