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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
4-Nitro-1H-pyrazole-5-carboxamide
- 库存:
999
- 供应商:
智溯科ZSK
- CAS号:
65190-36-5
- 规格:
咨询
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文献和实验PCR-SSCP[PCR-single strand conformation polymorphism]
或银染色,或用放射性同位素或荧光素标记在 PCR 引物上,然后进行检查,可提高分辨率。PCR-SSCP分析技术在检测与疾病有关的单个碱基突变、连锁分析等方面极其有用。在进行SSCP前首先要通过PCR扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾)。1、制备聚丙烯酰胺凝胶(PAG)按上表制所需的胶液,将梳子插入模子,从梳子一端加入胶,当胶液快到梳齿时,使 模子向加胶端倾斜,继续慢慢加胶,边加边放端模子以防止气泡形成,室温放置1h使 之凝固。然后拔掉梳子,顶部加入1×TBE封闭,备用。2、电泳取10μ
PCR-SSCP(PCR-single strand conformation polymorphism)
通过PCR 扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾). (1)制备聚丙烯酰胺凝胶(PAG) 按上表制所需的胶液,将梳子插入模子,从梳子一端加入胶,当胶液快到梳齿时,使 模子向加胶端倾斜,继续慢慢加胶,边加边放端模子以防止气泡形成,室温放置1h使 之凝固.然后拔掉梳子,顶部加入1×TBE封闭,备用. (2)电泳 取10μlPCR 产物,加入10μl变性剂(95%甲酰胺,10mmol/LEDTA,0.02%溴酚蓝)、30μl 石蜡油,煮沸5min,取出立刻放入
, 5mmol/L MgCL2 BCIP溶液/NBT溶液: 50mg/ml BCIP溶于100%二甲基甲酰胺 50mg/ml BCIP溶于70%二甲基甲酰胺 ⑤ 其他试剂 A. 考马斯亮蓝染液,1L 考马斯亮蓝R-250 1.0g、甲醇 450ml、冰醋酸 100ml B. 考马斯亮蓝脱色液 甲醇 100ml、冰醋酸 100ml、蒸馏水800ml 二、方法 1.Bio-Rad微型凝胶电泳模具的安装 带上手套将凝胶
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