- ￥900
- 烜雅生物
- XY-ZL0055
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
150
- 英文名：
pK19mobsacB
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pK19mobsacB
形式：质粒干粉
参考用途：pK19mobsacB载体是一个谷氨酸棒状杆菌基因敲除质粒。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +卡那霉素，37℃（克隆菌株DH5a）
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。 7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验粗心人。这样的错误会给将来的克隆造成麻烦。b)如果打算PCR后直接酶切，不要忘了在酶切位点的外侧再加上保护碱基，不同的酶对于保护碱基的要求是不同的。如果不设计保护碱基，则多半要用TA克隆的方式连接到质粒上，这时要注意Taq 酶的选择。若想在目的序列上附加上并不存在的序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包括这些序列，但是应该对其进行互补性和内部二级结构的检测。十、有时候，对于引物设计仅了解有限的序列信息。比如，如果仅知道氨基酸序列，可以设计兼并
确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质，“撒大网” l 双杂交和其他双成分系统 第一阶段：诱饵 -LexA 融合蛋白的鉴定 诱饵 -LexA 融合蛋白的构建 1． 将编码诱饵蛋白的靶 DNA 克隆到 LexA 融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的 LexA 融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的质粒作为 pBait 。 2． 采用下列 LexA
预先灭菌好的10cm2平皿铺板，培养基层2－3mm，待冷却凝固后，密封倒置于4℃保存备用。 碱裂解法提取质粒所用液体 1)溶液I: 溶菌酶 4mg 去离子水 1.4ml 500mM葡萄糖 0.2ml 100mMEDTA 0.2ml 250mMTris-HCl (pH=8.0) 0.2ml 2)溶液II: 去离子水 2.4ml 10%SDS 0.3ml 2MNaOH 0.3ml 3)溶液III: 乙酸钾 29.25
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