PfAgo-核酸内切酶PF-AGO-500

手把手教你做好体外 DNA 重组

，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板

DNA的限制性酶切与琼脂糖电泳

。琼脂糖凝胶对DNA的分离范围较广，用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至50kb的DNA。而分离小片段DNA(5~500bp)则需采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，其分辨力极高，能分离相差1bp的片段。 电泳过程中或电泳完毕直接利用低浓度的荧光染料EB(溴化乙啶)进行染色，EB是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。即可确定DNA条带在凝胶中的位置，而且灵敏度相当高，少至1~10ng的DNA条带即可直接在紫外灯下检出。 不同浓度琼脂

如何做好 Southern 杂交？

内的，而酶只有在甘油浓度 具体操作如下：在 1.5 mL 离心管中依次加入DNA（1 μg/μl）20 μg10× 酶切 buffer 4.0 μl限制性内切酶（10 U/μl）5.0 μl加 ddH2O 至 500 μl在最适温度下消化 1-3 hr。消化结束时可取 5 μl 电泳检测消化效果。如果消化效果不好，可以延长消化时间，但超过 6 hr 已没有必要。或者放大反应体积，或者补充酶再消化。如仍不能奏效，可能的原因是 DNA 样品中有太多的杂质，或酶的活力下降。消化后的 DNA 加入 1/10