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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 限制性核酸内切酶产品选择专题 单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指,在50μl 的反应体系里,采用随酶提供的 NEBuffer,用1个小时的时间,彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的eppendorf 管中进行,选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前,浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1,000 单位/ml。 质量
,例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等,常用的载体一般为质粒;根据需要可直接从公司购买合适的载体,也可以自己构建。(3)连接:目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体,使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同,产生三种连接方式:粘端连接、平端连接和不相配的连接。(4)转化:将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞,使其在宿主细胞内复制扩增或表达,赋予宿主细胞新的生物特征。(5)克隆化:重组 DNA 分子转化大肠杆菌后,在平板
的种名的头2个字母,小写;如果它的来源菌还有株系,则有第4个字母;最后用大写罗马数字,代表同一菌株中不同限制酶的编号。前三个字母用斜体表示。 如Hind Ⅲ代表从流感噬血杆菌(Haemophilus influenzac) d株中分离到的第3个限制酶。 Ⅱ类限制性核酸内切酶 1 一般性状 分子质量为60 ku,单链多肽,最适pH为6~8; NaCl有抑制作用,能被Mg2 激活,巯基有保护作用, 对热不稳定,通常是溶于含有50%甘油的缓冲液中贮存于–20℃环境下。取出使用时必须立即置于
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