Cas12b 切割底物-ssDNA-荧光型DNA-FAM-B

诺奖得主 Jennifer 最新研究：CRISPR/Cas12c 无需切割 DNA 就可实现基因沉默，抵御病毒入侵

与 DNA 结合依赖于 pre-crRNA 的加工 上述的实验已经证明 Cas12c 不进行靶 DNA 切割，那么 Cas12c 是否能结合经由 RNA 引导的互补底物？结合筛选实验表明，Cas12c 在低纳米摩尔范围内可结合目标 dsDNA，并对部分碱基配对的 DNA 具有更强的亲和力。因此，这些数据表明，像其他 Cas12 酶和 Cas9 一样，Cas12c 也与目标 ssDNA 具有较高的结合亲和力但不能检测到与 ssRNA 结合。 图片来源：Molecular Cell Cas12c

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

一、CRISPR-Cas 系统简介图 1 CRISPR-Cas9 系统介绍CRISPR-Cas9 系统是一种被广泛运用的基因组编辑工具，它来源于细菌的适应性免疫系统。CRISPR-Cas9 系统包括：Cas9 酶和一个向导 RNA。 向导 RNA 作用是引导 cas9 到基因组的特异性位点上切割。如图 1 所示。目前为止，CRISPR-Cas9 系统主要有两方面应用: 基因敲除和基因敲入。基因敲除时, 一旦 DNA 的双链断裂反应（DSB）被 Cas9 切割诱导发生, 细胞会启动 NHEJ

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

靠近 5』端的公共部分，保证每个 isoform 都会成功移码突变 通常情况下，为了便于下游 KO mutants 的鉴定，我们往往可以作如上设计：即 Cas9 的切割位点刚好被一个酶切位点跨过，且附近至少 100 bp 内酶切位点唯一。 为了减少 Off-Target 效应，请把设计好的 Target 放在括号中的网址里去做预测，尽量找到一条脱靶效应较小的来继续下游实验。 20 nt 确定之后，请