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文献和实验CRISPR RNA-干扰目标 DNA 片段。 在获得阶段,从外源性 DNA 获得新的间隔片段,并插入到 CRISPR 基因座的末端。然后 RNA 前体从 CRISPR 基因座上转录出来并加工成成熟的 crRNAs(CRISPR-RNAs),然后被一个或多个 Cas9 蛋白结合,形成核糖核蛋白靶向复合物,包含有一个引导序列。最终,Cas 蛋白会把与 crRNA 互补的序列切割降解。 CRISPR-Cas 免疫系统又被分为三种不同类型,又根据 cas 基因的发展史,分为数目可观的亚型。Ⅰ
靶序列并进行 DNA 的裂解。CRISPR 的实际应用CRISPR 系统作为一种精确的基因编辑技术,主要被应用在 DNA 编辑领域,可为疾病的靶向个性化治疗提供强大的技术支持。例如,可在待敲除的目的基因的上下游各设计一条向导 RNA(gpRNA1、gpRNA2),将其与含有 Cas9 蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中。则向导 RNA 可通过碱基互补配对靶向 PAM 附近的目标序列,Cas9 蛋白会使基因上下游的 DNA 断裂。而后细胞自身存在的 DNA 损伤修复的应答机制可使 dsDNA 断裂
什么是 CRISPR?CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats), 是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。 生命进化历史上,细菌为了将病毒的外来入侵基因清除,进化出 CRISPR 系统,利用这个系统,细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除,这是细菌特有的免疫系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物,该复合物能在一段 RNA 指导下,定向寻找目标 DNA 序列(图 1),并招募一个蛋白
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