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文献和实验-Strep-tag®的高亲和力,与 Ni Sepharose Excel 相比而言,Strep-Tactin®XT 的纯化效果仍具有显著优势。 05 Strep-Tactin®XT 优异的纯化效率 下面真实的实验中拍摄的图片,相信更能帮助大家理解。最新一代的 Strep-Tag®蛋白纯化系统因 Strep-Tactin®XT 与 Twin-Strep-tag® 具有极佳亲和力 (pM),成为了全方位的蛋白研究工具。 以上内容整理自蛋白结构解析前沿进展线上沙龙分享内容,实验数据来自 IBA
性结合到柱子里,其他的杂蛋白流出。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以也可以与咪唑结合这时候再用咪唑洗脱,梯度洗脱,咪唑竞争性结合到硫酸镍上,目的蛋白就被洗脱了,这时候收集浸出液,那么里面就是你要的目的蛋白,然后透析掉咪唑就行了。现在的柱子大多是预装柱,也就是不用自己填柱,就是装好镍的傻瓜柱,也不贵,上样,洗脱,基本两个步骤就结束了。剩下的看你怎么处理了。 高亲和Ni-NTA纯化介质(L00250)是把螯合剂(氮川三乙酸或NTA)共价偶联到琼脂 糖介质(4%交联)上,然后再螯合Ni2+制备
后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括: ■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶(Ermolova 2003)——目标蛋白切除标签后用BDA(蓝色葡聚糖)亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。 ■ Xklp3a,Tep3Ag和E8R(De Marco 2004)——用蛋白酶切割后,His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除
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