MagaBio plus 病毒 DNA/RNA 纯化试剂盒

Cas9 蛋白过表达慢病毒包装

试剂（可使用我公司转染试剂 Polyfect-V 或您的实验室中现有转染试剂）。 5、病毒包装细胞：我公司的 293V、HEK293 或者 HEK293T 均可使用。需要注意的是包装细胞状态对于病毒产量很重要。细胞聚团、贴壁不牢、生长缓慢等均是细胞老化的表现，这样的 293 细胞是不能使用的。 6、慢病毒纯化试剂盒（可用我们的 PEG 纯化产品，货号 P1201；或者其他公司的商品化试剂盒；推荐用超速离心纯化）。 7、Polybrene 慢病毒感染辅助试剂（6 mg/ml

病毒滴度的测定

15分钟，这一步是要除去残余的质粒DNA。然后换为2ml正常的培养基，继续培养48小时。 用0.5ml 0.25%胰酶-EDTA溶液消化细胞，在37℃放置1分钟。用培养基吹洗下，离心收集细胞。按照DNeasy试剂盒的说明抽提基因组DNA。每个样品管中加入200μl洗脱液洗下DNA。用DNA定量试剂盒定量（Bio-Rad）。基因组DNA可以稳定保存在-20℃至少2个月。 准备PCR所需的试剂和样品。为病毒序列检测引物配总管Ⅰ： Forward

病毒滴度测定方法总结

去其他培养板中的培养基，更换为含有 5 μg/mL polybrene 的新鲜培养基。将浓缩病毒用培养基稀释 200 倍，也就是取 1 μL 病毒加入到 199 μL 的培养基中。在 3 个培养孔中分别加入 0.5 μL，5 μL 和 50 μL 的稀释病毒。 感染开始后 20 小时，除去培养上清，换为 500 μL 含 DNaseI 的新鲜培养基。在 37℃ 消化 15 分钟，这一步是要除去残余的质粒 DNA。然后换为 2 mL 正常的培养基，继续培养 48 小时。