考马斯亮蓝染液试剂盒

【求助】关于一种蛋白western的问题

分子量这么小，用的SDS-PAGE胶浓度大一点，15%，跑胶时间不用太长，看见溴酚蓝跑的分离胶的中或中下部就停了，marker应该有专门小分子量预染marker，你找试剂公司的人跟他们讲一下你的要求，一般他们会有合适推荐给你的。转膜条件得摸，可以先按照实验室经常用的转膜条件试一下，如果是实验室转膜的目的蛋白分子量比如40kd用2h，你可以用1个小时试一下，转完以后的SDS-PAGE胶可以放到考马斯亮蓝染液染一下，看看小分子量蛋白转的情况，一抗先按照说明书建议的最高浓度做，二抗按照你所在实验

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝G-250染液的配制：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。此溶液在常温下可放置一个月。 采用Bradfold法进行蛋白定量，以1 mg/mlBSA 制作标准曲线。 首先，配1mg/ml BSA(1mg BSA溶于1ml三蒸水)，按下表配置梯度浓度的标准溶液。 浓度  

蛋白质定量

一、Bradford法 该方法用于大多数蛋白质定量是相当精确的，特别是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或溶菌酶等。但是，去污剂的浓度超过0.2%则影响定量结果。如TritonX-100，SDS，NP-40等。 1. Bradford染液配制：将100mg考马斯亮蓝溶于50 ml 95%的乙醇中，加入100ml 浓磷酸，然后，用双蒸水补充至200ml，放4C至少6个月。 2. 作标准曲线的蛋白质样本的准备：尽量