SweAgarose Protein G抗体纯化琼脂糖凝胶

【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。

[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然

一文搞定纯化实验 7 大常见问题！

酸胍）下洗脱。 绝招六：抗体的亲和纯化的常见方式 包括 Protein A、Protein G、Protein L 以及抗原特异性纯化。 抗体纯化策略：Cytiva 也提供了单克隆抗体多步纯化的成熟工艺平台。第一步采用 PrismA 等填料进行亲和捕获，第二步可以采用 adhere 多模式填料的抗体流穿模式去除宿主蛋白、内毒素、抗体聚集体、DNA、脱落的配基和病毒。也可以采用传统的三步法，在精纯步骤使用离子交换层析或针对复杂样品使用多模式层析达到更好的分离效果。 图 3：抗体

亲和层析

(II）标签为小分子量的蛋白纯化提供了另一种选择。在有些蛋白的表达时，也可以采用双标签系统，在蛋白上添加如His和Strep (II）两个标签，使用两个标签分别对蛋白进行纯化。 根据蛋白上所添加的标签选择相应的填料对蛋白进行纯化，常见的标签纯化填料及其特点如表9. 2. 抗体及抗体片段纯化填料 抗体的纯化主要是使用基于protein A及protein G配基的填料，尤其是基于protein A配基的填料，从1958年protein A蛋白被发现，到目前已经经历了多次的更新换代，Cytiva最新