5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（无气味、还原型）

免疫共沉淀实验指南

或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。

缓冲液配制指南

过硫酸胺 0.1 g ，加超纯水1.0 mL 溶解后，4 ℃ 保存，保存时间为 1 周。（-20 ℃长期保存） 30% 丙烯酰胺 溶于总体积为 50 mL 的水中，定容至 100 mL。室温保存于棕色瓶。 10× PBS（2L） NaOH 调 pH 值至 7.4，定容至 2 L。保存于室温。 还原型 5×SDS 上样缓冲液 混匀后，分装于 1.5 mL 离心管中，4 ℃ 可保存数周，-20 ℃ 可长期保存。 电泳液缓冲液 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 室温保存，1 次溶液可重复

含组氨酸标签的蛋白诱导表达及纯化操作指南！

待用。沉淀重悬于 100 微升 1×SDS 蛋白上样缓冲液中。取 10 微升上清加 10 微升 2×SDS 上样缓冲液，上清和沉淀分别进行 SDS-PAGE，分析溶解程度。5. 稀释透析复性：每毫升上清缓慢加入 9 毫升 6M 尿素的复性液中。装入经 10 mM NaOH 和 1.0 mM EDTA 煮沸 30 分钟，蒸馏水洗涤干净的透析袋中。在 4℃ 10 倍以上体积含有 2M 尿素的复性液中透析 5 个小时。6. 取出透析袋，再放入 4℃ 10 倍以上体积的复性液中透析过夜。7. 取出透析