2×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（无气味、还原型）

免疫共沉淀实验指南

或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

（十二烷基硫酸钠）50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂Tris-HCl 缓冲液20 mM Tris-HCl pH 7.5蛋白酶抑制剂●电泳、转膜、封闭缓冲液Laemmli 2× 缓冲液/上样缓冲液4% SDS10% 2-巯基乙醇20% 甘油0.004% 溴酚蓝0.125 M Tris-HCl测定 pH 并调节至 pH 6.8。电泳缓冲液（Tris-甘氨酸/SDS）25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸0.1% SDS测定 pH，pH 应为约 8.3。必要时进行调节。转膜缓冲液

Western blot 实验步骤及其注意事项

蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋 白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)。 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。