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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
武汉赛奥斯生物科技有限公司
- 库存:
99
- 生长状态:
贴壁生长
- 运输方式:
常温/干冰
- 细胞形态:
间质细胞样
- 物种来源:
小鼠
- 规格:
1×10⁶cells
Py8119小鼠恶性乳腺癌细胞
产品编号:CL-228m
一、细胞简介
Py8119是一种间充质样细胞系,于2004年从患有腺癌的成年雌性小鼠的乳腺中分离出来。该细胞系是研究恶性乳腺肿瘤发生和转移的多步进展的模型,也可用作三阴性乳腺癌的临床前小鼠模型。PY8119细胞系代表源自MMTV-PyMY(小鼠乳腺肿瘤病毒启动子驱动的多瘤中T抗原)转基因C57BL/6雌性小鼠中自发产生的乳腺腺癌的间充质肿瘤细胞。该细胞系携带多瘤病毒中T癌基因,但其表达下调。Py8119细胞在某种程度上呈纺锤形,在培养中不会形成离散的集落。该细胞系非常强大,可在体内形成侵袭性间质肿瘤。原位注射时肿瘤不会转移,但尾静脉注射会导致多个部位出现肿瘤,包括肺、肝和骨。Py8119表达间充质标记物N-钙粘蛋白、波形蛋白、Slug(SNAI2)和细胞角蛋白14,并且雌激素受体、孕激素受体和HER2(人表皮生长因子受体2)的表达呈阴性。与同样源自MMTV-PyMY转基因C57BL/6雌性小鼠(PubMed)的分化程度更高、上皮样CRL-3279、Py230细胞相比,Py8119细胞系表现出更未分化的表型,并且在细胞培养物中生长更积极。Py8119细胞与Py230细胞是一对鼠乳腺细胞系,具有独特的间质(Py8119)或上皮样(Py230)特征,源自C57BL/6小鼠中MMTV-PyMT转基因诱导的乳腺肿瘤,可用于研究乳腺肿瘤发生。
二、细胞特性
来源:小鼠
形态:间质细胞样,贴壁生长
含量:>1x10⁶cells
规格:T25瓶x1(常温运输)/2mL冻存管x2(干冰运输)
用途:本产品仅供实验室研究使用,不可用于动物或人类治疗或诊断用途
三、完全培养基配制
1) 该细胞完全培养基为:F12K+5%FBS+1%P/S
2) 培养环境:37℃;95%Air,5%CO₂;湿度为70%~80%
3) 冻存液:推荐使用非程序无血清细胞冻存液(货号:RC-0102)
四、细胞接收注意事项
1) 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染,冻存细胞若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落,请拍照后及时与我们联系。
2) 75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于培养箱静置约2-3h。在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 对于贴壁生长的细胞:①静置后显微镜下观察细胞生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。②若细胞汇合度未超过80%,可去除培养瓶中旧液(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重新打入原培养瓶中),加入新的完全培养基6-8mL,放入培养箱中继续培养(若培养瓶为密封瓶盖须拧松瓶盖)。③若细胞汇合度超过80%,可进行传代处理(若因运输振动脱落的细胞需要离心回收),首次传代,建议1:2传代(两个T25)。
细胞培养操作说明
一、细胞复苏
1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中,摇晃冻存管加速解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内容物加入含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm离心5min。
3. 弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞,接种到含有6-8mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱中培养。
4. 第二天换液并检查细胞密度。
注意:在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩,避免冻存管爆炸造成人员伤害。
二、细胞传代:细胞密度达80%~90%,即可进行传代
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2min(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后,加5mL以上含10%FBS的完全培养基终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL新的完全培养基,放入培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
三、细胞冻存
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步骤如下:
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清,用细胞冻存液重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞放入-80℃冰箱中,24h后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全柜内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
| CL-015r | RBL-2H3 大鼠嗜碱性白血病细胞 |
| CL-017r | DITNC1 大鼠脑间质细胞 |
| CL-018r | C6 大鼠脑胶质瘤细胞 |
| CL-019r | CTX 大鼠脑星形胶质细胞 |
| CL-020r | GH3 大鼠垂体瘤细胞 |
| CL-022r | A7R5 大鼠胸大动脉平滑肌细胞 |
| CL-023r | H9C2 大鼠心肌细胞 |
| CL-024r | INS-1 大鼠胰岛细胞瘤细胞 |
| CL-025r | MADB106 大鼠乳腺癌细胞 |
| CL-026r | UMR-106 大鼠骨肉瘤细胞 |
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