Ublot™ PVDF印迹膜，0.45 μm，W3F43

产品简介

Ublot™  PVDF印迹膜用于从各种凝胶基质中转移蛋白质。与硝酸纤维素膜相比，它具有更佳的操作性能。

这款疏水膜有两种孔径：0.45μm 和 0.22μm，使其能够结合各种分子量范围的蛋白质：

0.45μm孔径：适用于大多数蛋白质，提供更高的检测灵敏度。

0.22μm孔径：适用于分子量小于20,000的蛋白质，确保更好地吸附和保留小分子蛋白质。

Ublot™  PVDF印迹膜具有出色的蛋白质保留性、高物理强度和广泛的化学相容性，使其成为免疫测定的最佳选择。

订购信息

货号	产品名称	产品孔径	产品尺寸
W3F21	Ublot™ PVDF印迹膜	0.2 μm	30 cm×1m
W3F23		0.2 μm	30 cm×3m
W3F41		0.45 μm	30 cm×1m
W3F43		0.45 μm	30 cm×3m

 

蛋白质印迹的常用方法和免疫检测

推荐转印操作步骤（半干转印为例）

1. 用SDS PAGE凝胶分离蛋白质样品和蛋白Marker。

2. 小心地裁切和放置凝胶，并将凝胶在冷转移缓冲液中平衡5~20分钟。

3. 将膜和滤纸切成适合凝胶的尺寸。将PVDF膜在甲醇中预湿20秒，直至其从不透明的白色变为均匀的半透明灰色，然后浸泡在超纯水中1-2分钟，去除试剂残留；随后在冷转移缓冲液中平衡2-3分钟，直至可以使用。

使用提醒：

膜润湿后，请勿使其变干。如果膜部分变干（变成不透明的白色），也必须重新润湿。

4. 依次组装转印装置，转印夹子→海绵垫→滤纸→预湿的膜→裁切好并预湿的凝胶→滤纸→海绵垫→转印夹子，每放置一层要注意避免起皱、折叠或存在气泡（可利用切胶板等工具轻轻赶压气泡，使每层紧密贴合）

5. 按照所用转印装置说明设置运行条件等，开始转印。

6. 转印结束后，取出印迹膜，并在超纯水中短暂冲洗去除凝胶碎屑。印迹膜可以风干储存，也可以立即使用用于免疫检测步骤。

免疫检测

成功进行蛋白质印迹实验的一些关键因素，例如蛋白质浓度、封闭液和抗体浓度，可能需要在以下方案中进行优化。

标准免疫检测

1. 如果印迹膜已干，请将其重新浸湿，浸泡在甲醇中 15 秒，或直至其颜色从不透明的白色变为半透明的灰色。

2. 用超纯水冲洗印迹膜 1 分钟。

3. 将印迹膜放入封闭缓冲液中，轻轻搅拌孵育 1 小时。

4. 将一抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

5. 将印迹膜放入稀释的一抗溶液中，室温孵育 1 小时（或 4°C 过夜），轻轻搅拌。

6. 使用洗涤缓冲液（含 Tween®-20 表面活性剂的缓冲液（TBST 或 PBST））洗涤印迹膜 3-5 次，每次 5 分钟。

7. 将二抗稀释于商品化抗体稀释液、洗涤缓冲液或封闭缓冲液中。

8. 将印迹膜放入稀释的酶标记二抗溶液中，室温孵育1小时。

9. 用洗涤缓冲液洗涤印迹膜3-5次，每次5分钟。

10. 将印迹膜放入干净的容器中，并加入相应的检测试剂。

11. 按照检测所用试剂说明书操作，孵育1-5分钟。

（1） 对于HRP或AP化学发光试剂，将印迹膜暴露于X光胶片或使用成像系统获取数字图像。

（2）对于显色检测，加入试剂并等待信号出现。

Ublot™  PVDF印迹膜性能及应用

 

 

实验所需试剂

1. 甲醇

2. 超纯水

3. 转印缓冲液推荐

l 半干转移：25 mM Tris Base，192 mM Glycine，（pH 8.3，含10-20%醇）

l 干转移：48 mM Tris，39 mM Glycine，（pH 9.2，含10-20%醇）

4. 封闭缓冲液：商品化快速封闭剂或0.5-5%洗涤缓冲液封闭剂（牛血清白蛋白、酪蛋白或脱脂奶粉）

5. 洗涤缓冲液：含0.05-0.1% TWEEN ® 20的磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris缓冲液（TBS）（PBST或TBST）。

l PBS成分：10 mM Na₂HPO₄.12H₂O，pH 7.2，0.9% NaCl

l TBS成分：10 mM Tris，pH 7.4，0.9% NaCl

Ublot™  PVDF印迹膜使用注意事项

1. 处理膜时务必佩戴手套，以免留下指纹。

2. 使用钝镊子，以免损坏膜。

3. 切割或处理膜时，请保留保护纸（浅蓝色纸），但膜润湿后请丢弃。

4. 小心处理膜，避免刮伤表面，切勿折叠。

5. 疏水性 Ublot™ PVDF 印迹膜必须预先用甲醇溶液润湿。润湿后，膜会从不透明变为半透明。

6. 蛋白质转印后，用超纯水清洗印迹膜以去除残留碎屑。

7. 印迹膜可风干后在 4°C 下保存数月（以备将来使用）或立即使用。

蛋白质转移方法的比较

转印缓冲液中的醇（甲醇、乙醇或异丙醇）有两个重要作用：稳定凝胶尺寸和去除蛋白质分子上络合的十二烷基硫酸钠 (SDS)，从而增强蛋白质与膜的结合。

然而，对于较大的蛋白质或存在溶解性问题的蛋白质，建议降低醇浓度并在转印缓冲液中添加少量 SDS。这种调整可以改善蛋白质从凝胶中的洗脱，同时保持其在转印过程中的溶解性。

免疫测定

免疫测定是一种基于抗体的技术，用于定量检测和鉴定印迹膜中的蛋白质或抗原。该过程包括以下步骤：

1. 封闭未占据的膜位点，以防止非特异性抗体结合。

2. 将膜与可结合目标蛋白的一抗孵育。

3. 清洗以去除任何未结合的一抗。

4. 将膜与可结合一抗的偶联二抗孵育。

5. 清洗以去除任何未结合的二抗。

6. 将膜与可与偶联二抗反应的底物孵育，从而揭示目标蛋白的位置。

Ublot™ PVDF 转印膜选择指南

下表提供了针对特定蛋白质印迹应用的建议。由于蛋白质的特性（例如电荷密度、构象和疏水性）存在差异，并非所有蛋白质在膜表面的表现都相同。因此，您可能需要使用不同的Ublot™ PVDF 转印膜进行实验，以优化您特定应用的结果。