mRNA帽子结构2'-O-甲基转移酶

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase（货号：UA070092）产品描述

产品特点

• 表达宿主：E. coli，确保了蛋白的高效表达和可溶性。
• 分子量：40 kDa（Reducing），与理论分子量一致，保证了蛋白的纯度和完整性。
• 纯度：＞95%（SDS-PAGE 和 HPLC），确保了蛋白的高纯度。
• 标签：His Tag，带有 His 标签，便于蛋白的纯化和检测。
• 性状：Liquid，液体形式，便于使用。
• 缓冲体系：20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 8.0 @ 25°C)，确保蛋白的稳定性和活性。
• 储存条件：Store at -25 ~ -15℃ for 2 years，保证了蛋白的长期稳定性。

产品组分

• Storage Solution：50 U/μl mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase in 20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol (pH 8.0 @ 25°C)
• 10* Capping Buffer：500 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT (pH 8 @ 25°C)

操作步骤

1. 将未加帽 RNA 和无核酸酶水混合，总体积为 14.0 μl。
2. 在 65°C 下加热 5 分钟。
3. 将管置于冰上 5 分钟。
4. 按照以下顺序添加以下组分：

1. 在 37°C 下孵育 60 分钟（对于长度小于 200 nt 的 RNA，增加孵育时间至 2 小时）。
2. 根据需要进行 RNA 纯化，以用于下游应用。

注意事项

1. RNA 5' 端结构的影响：加帽反应效率受 RNA 5' 端结构的影响，建议通过热变性（65°C 加热 5 分钟，置于冰上 5 分钟）打开 RNA 5' 端的复杂结构。根据 RNA 5' 端的结构复杂性调整变性条件。如果 RNA 5' 端没有复杂结构，可以省略此步骤。
2. 反应时间：加帽反应通常在 60 分钟内完成。如果 RNA 5' 端结构复杂或 RNA 长度较短（≤ 200 nt），可以将反应时间延长至 120 分钟。
3. SAM 的稳定性：SAM 在 pH 7-8、37°C 下不稳定，需要在反应开始前新鲜配制。为了避免 SAM 降解，工作溶液需要在冰上保存。
4. RNase 污染：建议在反应体系中加入 RNase 抑制剂以防止 RNase 污染，推荐浓度为 1-2 U/μl。
5. 下游应用：本产品加帽后的 RNA 可以通过 Poly(A) 聚合酶在 3' 端添加 Poly(A) 序列，形成完整的 mRNA，可用于后续的转染实验或体外翻译实验。

酶活定义

生物活性

电泳 (SDS-PAGE)

体积排阻色谱 (SEC-HPLC)

反相高效液相色谱 (RP-HPLC)

背景信息

关于斯达特(Starter)，国产抗体专家：
杭州斯达特(www.starter-bio.com)志在为全球生命科学行业提供优质的抗体、蛋白、试剂盒等产品及研发服务。依托多个开发平台：重组免单抗、重组鼠单抗、快速鼠单抗，重组蛋白开发平台 (E.coli,CHO,HEK293,InsectCells)，已正式通过欧盟98/79/EC认证ISO9001认证ISO13485.