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伊莱博生物科技(上海)有限公司
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大鼠视网膜光损伤模型
大鼠视网膜光损伤模型
1. 构建方法
1.1 连续低强度光暴露法
实验动物:选择12-15周龄的Wistar大鼠。
光暴露条件:将大鼠置于200 lx的连续冷白光LED灯下,光照强度通过光度计测量。
实验设计:大鼠暴露于连续光刺激1-10天,分别在不同时间点(1天、2天、4天、7天、9天和10天)处死大鼠,取视网膜进行分析。
对照组:设置12:12小时光照周期(200 lx)和完全黑暗(DD)对照组。
1.2 短期高强度光暴露法
实验动物:选择健康成年大鼠。
光暴露条件:使用5000 lx的连续光暴露1、2、3小时,分别评估不同时间点的损伤程度。
实验设计:光暴露后,测量视网膜外核层(ONL)厚度变化,评估损伤程度。结果显示,光暴露1、2、3小时后,ONL厚度分别减少11.3%、25.6%和72.5%。
1.3 蓝光LED诱导的局部光毒性模型
实验动物:选择 albino 大鼠。
光暴露条件:使用蓝光LED(400 nm)诱导局部视网膜损伤,光照强度通过计算得出,假设约80%的光到达视网膜。
实验设计:光照通过角膜和晶状体到达视网膜,损伤主要集中在颞上区域,该区域视锥细胞和视网膜神经节细胞密度最高。
2. 损伤机制
光感受器细胞凋亡:连续低强度光暴露可导致光感受器细胞凋亡,且该过程不依赖caspase-3激活。
视紫红质磷酸化:光暴露后,视紫红质在Ser334位点的磷酸化水平增加,表明光转导级联反应的调节异常可能参与视网膜退化。
视网膜重塑:光诱导的光感受器退化可导致视网膜重塑,表现为“视网膜下血管复合体”的形成,这些结构压迫和中断视网膜神经节细胞(RGC)的轴突运输,最终导致RGC死亡。
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文献和实验大鼠麻醉后,背部脱毛,于 T9-T11 胸椎区域消毒,划约 2-3cm 纵行切口,咬除椎板,暴露硬脊膜,将大鼠固定于多功能鼠固定台,应用脊髓打击器撞击骨髓(打击高度 12mm,重量 10g)大鼠出现尾部痉挛性摆动,表明造模成功。造模后,对各组大鼠进行脊髓损伤的行为学评分,利用斜板实验评测动物脊髓损伤后神经功能恢复情况,分析在脊髓损伤不同时期的变化规律。
麻醉好的大鼠绑定在多功能脑立体定位仪上,沿正中线切开头部皮肤,暴露出骨膜,轻轻切开骨膜。纯双氧水擦拭骨面,以前囟为准,采用两点注射:右侧黑质致密部(SNc)、中脑腹侧被盖区(VTA)。 SNc:前囟后(5.0)毫米, 矢状缝右侧(1.5)毫米, 硬脑膜下(7.8)毫米; VTA:前囟后(4.6)毫米, 中线右侧(0.9)毫米, 硬脑膜下(7.3)毫米。 用牙科钻钻开颅骨,用5μL微量进样器将药物注入右侧纹状体(速度为1.0 mm/min),每孔4μL,注射速度为1μL/min,注射完毕后留针
大鼠俯卧位固定到手术台上,持续低剂量麻醉。消毒,沿右后肢大腿后外侧股骨干作一切口,暴露坐骨神经干及其远端分支,钝性分离肌肉,用玻璃分针分离出胫神经、腓总神经,分别用6-0丝线双重结扎胫神经、腓总神经,切断结扎远端,同时将神经断端远端剪掉2mm,注意保留腓肠神经,手术过程中应避免牵拉腓肠神经及其伴行的血管。操作结束后逐层缝合组织,再次碘伏消毒。
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