Fura-FF, AM [Fura-2FF, AM] *CA

亲和层析

分子在纯化时若无商品化的亲和填料可供选择，也可以利用预活化填料，按照说明书介绍的流程，自行偶联生物分子到填料上，形成独有的亲和填料，来分离纯化其对应的生物分子，如酶/底物、抗原/抗体等。如需要纯化某种单抗，可以将相应的抗原偶联到预活化填料NHS activated Sepharose 4FF或CNBr activated Sepharose 4FF上，然后通过亲和层析实验，就可以实现抗体的高纯度纯化。偶联配基时，需要考虑活化基团是否与填料匹配，以及填料本身是否带有间隔臂。如果偶联的配基是蛋白

细胞内钙测定

１.5mmol/L,细胞内外[Ca ]相差104 。细胞膜内外的[Ca ]差是细胞外的Ca 进入细胞内的推动力。   ( 组织细胞以12.5%胰蛋白酶消化20－30 min)   37℃ 温育10min, 加入Fura-2/AM（终浓度为2-5ug/ml），37℃ 恒温震荡45 min,负载后细胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次，用Hank’s液调细胞数为1×106 ，测定前37℃ 复温5-10 min。   37℃ 温育10 min

柱上酶切那点事儿

择它们进行 GST 标签去除时，可串联一个 HiTrap Benzamidine FF(High Sub) 预装柱，因其可以特异性结合丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶和类胰蛋白酶。这样仅用一步就实现酶的去除并获得纯的切割后的目标蛋白。 酶切注意事项 1. 柱上酶切前通常需要进行酶切条件的摸索：可通过一定蛋白样品预酶切以确定最佳反应条件及酶用量。对于不易酶切的蛋白，可通过增加酶量及延长反应时间提高酶切效率。 2. 酶切效率可能会由于一些物质的影响而降低，如在蛋白