人淋巴细胞分离液 内毒素<0.125EU （医用）

MD-YL1077-1 人淋巴细胞分离液 内毒素<0.125EU （医用）

 

产品货号：MD-YL1077-1

产品名称：人淋巴细胞分离液 内毒素<0.125EU （医用）

产品规格：200mL

产品简介：

【预期用途】

人淋巴细胞分离液属于生化试剂，利用人淋巴细胞分离液对机体细胞标本进行前处理，以获取所需要的细胞标本。

【检验原理】

密度梯度离心法。

【主要组成成分】

{C}a） {C}葡聚糖(Ficoll ) b)泛影葡胺 c）蒸馏

【储存条件及有效期】

人淋巴细胞分离液产品应在 18ºC～25ºC 环境下避光保存，保存期限 2 年。建议启封后一次性使用，如需保存，应防止污染。

【适用仪器】

操作过程中所使用的容器及直接接触的物品（如离心管、移液管、滴管、细胞冻存管等）要求使用一次性无菌产品。

【样本要求】

1、骨髓、脐带血、外周血要求新鲜，避免冷冻。

2、骨髓、脐带血、外周血采集时必须加抗凝剂，推荐使用枸椽酸钠，每 100ml 脐带血加 2.2%枸椽酸钠 10ml。没有枸椽酸钠时，也可以用肝素代替，每 100ml 脐带血用 1/2 支肝素（12500 单位包装的），每支肝素用注射用盐水稀释至 10ml。

【检验方法】

（注：以下方法适用于从外周血中分离人淋巴细胞。如从骨髓、脐带血中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离人淋巴细胞。）

1、准备无菌的锥形离心管，加入人淋巴细胞分离液。（按人淋巴细胞分离液与稀释后的全血 1:1 比例加入）

2、用无菌的 Hank’s 液或 PBS 缓冲液 1：1 比例，稀释抗凝过的全血样品，混合均匀。

3、小心沿着管壁，接近人淋巴细胞分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在人淋巴细胞分离液上面。（注意：切记不要搅浑人淋巴细胞分离液）

4、小心放进台式离心机，1200-2000rpm 离心 20-30 分钟。（具体分离条件各实验室自定）

5、小心取出离心管，切记不要震动。

6、可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为人淋巴细胞分离液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。

7、小心抽掉白色环状层以上三分之二血浆液，切记不要搅动白色环状层。

8、用无菌塑料吸管小心吸取白色环状层液体，每支离心管中收集液的体积不超过 20ml。

9、在第 8 步收集液中加注射用生理盐水至 50ml 充分混匀，离心力 2500rpm，离心 5 分钟，弃去上清，收集。

10、再用注射用生理盐水洗涤 2 次（离心条件同第 9 步），收 集细胞备用。

【阳性判断值或者参考区间】

分离出的有核细胞存活率≧96%；有核细胞收集率≧85% 细胞回收率检测：

{C}1. {C}取分离细胞前的血样，用血细胞分析仪或显微镜手工计算 有核细胞的浓度，根据分离前的细胞总体积计算出有核细胞的 总数（A）。

{C}2. {C}取细胞分离后的血样，用血细胞分析仪或显微镜手工计算有 核细胞的浓度，根据分离前的细胞悬液的总体积计算出有核细 胞的总数（B）。

{C}3. {C}回收率=B/A×100%。

{C}4. {C}细胞存活率检测：取一滴分离后的细胞悬液，用终浓度 4% 的台盼蓝染液染色 3-5 分钟，普通光学显微镜下，计数未被染 成蓝色细胞占总细胞数的百分比即为存活细胞的百分比。

【检验结果的解释】

1、整个分离过程中，温度应控制在 18℃-25℃且在无菌环境下，避免微生物的污染，否则会影响分离质量。

2、细胞分离过程中应采用相应的适当的转速。

3、稀释后的样本有核细胞得率高，将稀释的血液叠加于人淋巴细胞分离液上时，一定要细心，动作要轻，避免冲散分离液面或与分离液混合而影响分离结果。

4、吸取细胞时，应避免吸出过多上清液或分离液而导致血小板污染。

【检验方法的局限性】

本试剂只适用从人类骨髓、脐带血、外周血中分离纯化有核细 胞（包括淋巴细胞），不能用于分离其他细胞。

【产品性能指标】

外观：为微带乳光的水溶液；

内毒素：<0.125EU/ml；

比重：1.077±0.001

PH 值：7.0—7.5

【注意事项】 

1.本试剂只能用于体外诊断，请按照说明书的使用方法正确使 用。

2.操作过程应在万级洁净实验室的局部百级净化工作台内完 成，以保证整个过程无菌操作。

3.试剂不得用紫外线消毒，打开外包装，包装瓶用酒精消毒。

4.试剂如出现浑浊、沉淀或有絮状物则不能使用，出现结晶属 于正常现象不影响使用。

5.整个分离过程中，温度应控制在 18-25℃且在无菌环境下， 避免微生物的污染，否则会影响分离质量。

6.由于不同品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和 四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调 节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。

7.配制细胞悬液所用的培养液要求等渗，具缓冲作用，并对细 胞无毒性。