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204tips x 1rack/box
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文献和实验人 iPS 细胞体外分化为气道上皮肺类器官用于呼吸系统疾病研究应用以及iPSC操作指南
台中,使用体积设置为 10 µL的无菌 20 µL 移液器吸头从 60 mm 培养皿中6个较完整的类器官,并将其转移到 96 孔 U 型底板的 1 个孔中。 6. 将 96 孔板从解剖台转移到组织培养超净台中。 注意:为避免 ECM基质胶过早凝胶化,我们建议一次制备不超过 3 个细胞培养小室。 1. 将 60 µL 冷的 100%的减生长因子(GFR) ECM基质胶加入步骤 5 中的 96 孔板的每个孔中。通过移液器轻轻混合几次,避免产生任何气泡。 总体积 = 每孔130 µL。
又有两种颗粒型号:中(40µ~120µ),超细(10µ~40µ)。颗粒越细,流速越慢,分离效果越好。 表 DEAE-纤维素与Sephadex1比较 项 目 DEAE纤维素 Sephadex 交换量 小 较大 非特异性吸附 较大 小 分离纯度 较好 好 分离时间 较粗 较长 应用范围 较窄 较宽 预处理 繁琐 方便 (三)试验方法 1.凝胶的选择 根据层析物质分子量的大小选择不同型号的凝胶,如除盐和除游离的荧光素,则可选用粗、中粒度的G28或G500
。另有tianjin_glioma战友提供的方法:在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9 ug/ul) 60-80 µl (注意体积不可太大,以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好),置37 ℃ 30 min使Matrigel聚合成凝胶。 2. 有基质胶的Transwell小室制备 Chemicon公司的ECM550系列说明书要求,将小室放入培养板中,在上室加入300 µl预温的无血清培养基,室温下静置15-30 min,使基质胶再水化。再吸去剩余培养液。 二、制备细胞悬液 ① 制备
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