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- 2025年07月11日
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北京云肽生物科技有限公司
PolymorphPrep多型核细胞分离液
产品货号：1114683
产品名称：PolymorphPrep多型核细胞分离液
产品规格：250mL
产品简介：
PolymorphPrep是一种即用型、无菌、内毒素含量很低的分离人外周血中多形核粒细胞（polymorphonuclear granulocytes）的分离液。
分离原理：
Polymorphprep分离液的高渗透压可使红细胞失水而缩小，从而增大红细胞的有效浮力密度；分离液中的右旋糖苷能使红细胞聚集并在溶液中快速沉降，随着离心过程红细胞的逐渐沉降，Polymorphprep分离液也形成连续梯度，这样只要离心力和离心时间选择合适，即可将多叶核白细胞停留于分离液中，而红细胞沉降在分离液底部，并且单个核细胞（PBMC）仍就停留于分离液和血液的界面，从而达到同时分离获得多叶核白细胞和单个核细胞的效果。
注意事项：
该分离液仅适用于人的未作稀释的血液，不适用于动物。
待分离血液和待用分离液的温度需要保持在18度-22度之间，因为温度的变化会影响分离液的密度和粘度，从而影响分离效果。
分离液的保存应置于无菌环境，并避光保存。
相关技术参数：
成分：泛影葡胺钠（Sodium diatrizoate）：13.8%（w/v）；
右旋糖苷500（Dextran 500）：8.0%（w/v）
密度（Density）：1.113±0.001g/ml
渗透压(Osmolality)：445±15mOsm
内毒素含量（Endotoxins）：<1.0EU/ml
分离所得多叶核白细胞中红细胞的含量：整个细胞数目的2-6%。
分离效果图如下：
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文献和实验（1）细胞核的分离：将培养的细胞制成细胞混悬液，或以胰蛋白酶消化法于培养盖上收集培养细胞。应用MgSO4染色分离方法分离细胞核（Van den Engh et al 1986, 在Traok和Van Den Engh 34章 ）。细胞混悬液浓度为5×106/ml。利用RNA酶消化后，使核从细胞分离，细胞核混悬液浓度为4～5×106细胞核/ml。（2）细胞固定和酸的处理：在5 ml试管内加冷的100%酒精不断旋转以达到满意的固定。在冰上停留10 min。在4 ℃离心（×150 g）10 min
)；DMEM培养液（含4000 mg/L D-葡萄糖，4 mmol/L L-谷氨酰胺，添加3.7 g/L NaHCO3，20 mmol/L HEPES，肝素钠 100 mg/L，青霉素 100 U/ml，链霉素 100 ug/ml），pH值调至7.4，过滤除菌后分装保存于4 ℃，用时加入20%FBS，1 ng/ml bFGF。 1.5 培养皿处理 涂布3种不同的基质：培养前一天加入1 ml 1%明胶于35mm塑料培养皿，置于37 ℃培养箱过夜，接种前用D-Hanks液漂洗2次；接种前4 h，加入鼠尾
Dickinson），分析软件为CellQuest，每个标本分析细胞数≥1×104 。 1.2 方法 (1 ) γδT细胞的培养 取健康献血者静脉抗凝血100ml，经1500r/min离心15min,再吸取白细胞层约10ml加入淋巴细胞分离液上，以2000r/min离心20min，吸取单个核细胞（PBMC）层，用生理盐水洗涤，1500r/min离心10min，洗涤3次后计数细胞后备用。将PBMC加入γδT细胞RPMI1640培养液中（含10%小牛血清和5%人AB血清），调整细胞数为1×108/L
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