- ￥1280
- gemig
- XFG70459
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
5
- 规格：
96T
产品货号：XFG70459
产品规格：96T
储存条件：2-8℃
有效期：6个月
本产品仅供科研实验用，不做其他用途！
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠-氮-钠做为防腐剂。
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免
反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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文献和实验核糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针（32P或生物素）与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA;未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化，故该方法命名为RNA酶保护实验。对于32P标记的探针，杂交
在25℃温育10分钟，然后37℃水浴40~60分钟)。 7．在70℃加热10分钟结束反应，置冰上进行后续实验或冷冻保存。 四、后续实验 1．第一链cDNA的合成产物能够直接用于PCR扩增。 2．第一链cDNA的合成产物能够直接用于第二链合成必须调适为能够使用下列产品： DNA聚合酶 T4 DNA连接酶 核糖核酸酶H S1核酸酶 五、RNA 操作指南 RNA 抽提纯化是分子生物学研究的基本工作内容。但是由于RNA 酶（RNase）的广泛存在和难以灭活的特性
到细胞外；微囊泡（Microvesicles）直径为 100-1000 nm，以出芽的形式释放到细胞外；凋亡小体（Apoptotic body）直径为 50-2000 nm，由凋亡细胞产生。由于各种胞外囊泡的大小可能有交叉，所以要想通过分离手段得到某种纯化的特定囊泡是很难实现的。 图一 胞外囊泡的分泌 （图片来源于文献） 外泌体携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类和核酸，其中蛋白质包括跨膜蛋白、信号转导蛋白、细胞支架蛋白、酶等，现在很多文献会选择其中的几种膜蛋白和膜内蛋白作为外泌体的鉴定
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