兔 AIG1 (Androgen Induced Prote

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解 30 min，细胞裂解液于 4 ℃，最大转速离心 30 min 后取上清； 取少量裂解液以备 Western blot 分析，剩余裂解液加 1 μg 相应的抗体加入到细胞裂解液，4 ℃ 缓慢摇晃孵育过夜； 取 10 μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗 3 次，每次 3 000 rpm，离心 3 min； 将预处理过的 10 μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中 4 ℃ 缓慢摇晃孵育

基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备

质胶样质谱鉴定过程中，多肽的回收是一个问题。如下图所示，将胶样中同样的20 ng兔骨骼肌肌动蛋白用不同的染色法进行染色：常规银染色（无戊二醛）与锌-咪唑锌阴性染色法。染色后，用胰蛋白酶在凝胶中对蛋白质进行消化，磁珠法对样品进行浓缩，用MALDI-MS进行蛋白质谱鉴定。结果发现，与阴性染色的蛋白质相比，蛋白质的银染色导致胰蛋白酶肽的回收率降低（比较图中左右两边肽的S / N比率）。该影响可通过去除蛋白质染色过程中银染试剂的方式消除。 图注：20 ng (500 fmol)兔骨骼肌肌动蛋白经胰酶

【求助】那位大侠用过CAMP测定试剂盒？急需帮忙

检测中做出了巨大贡献，但同时它也有着明显的缺陷： 1，兔多抗对cAMP，cGMP的特异性不高，会与其他核苷类似分子发生交叉反应，尽管可以通过特异亲和提纯降低交叉，但仍然无法消除交叉； 2，兔多抗对cAMP和cGMP的亲和力受高浓度的二价阳离子（比如Mg2+和Ca2+）的影响； 3，兔多抗在制备的过程中存在个体差异和批间差异，难以保证检测数据的重复性； 4，兔多抗试剂盒在cAMP，cGMP样品的处理上也需要进行乙酰化处理，这与兔