兔 DPYSL3 (Dihydropyrimidinase

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解 30 min，细胞裂解液于 4 ℃，最大转速离心 30 min 后取上清； 取少量裂解液以备 Western blot 分析，剩余裂解液加 1 μg 相应的抗体加入到细胞裂解液，4 ℃ 缓慢摇晃孵育过夜； 取 10 μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗 3 次，每次 3 000 rpm，离心 3 min； 将预处理过的 10 μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中 4 ℃ 缓慢摇晃孵育

基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备

质胶样质谱鉴定过程中，多肽的回收是一个问题。如下图所示，将胶样中同样的20 ng兔骨骼肌肌动蛋白用不同的染色法进行染色：常规银染色（无戊二醛）与锌-咪唑锌阴性染色法。染色后，用胰蛋白酶在凝胶中对蛋白质进行消化，磁珠法对样品进行浓缩，用MALDI-MS进行蛋白质谱鉴定。结果发现，与阴性染色的蛋白质相比，蛋白质的银染色导致胰蛋白酶肽的回收率降低（比较图中左右两边肽的S / N比率）。该影响可通过去除蛋白质染色过程中银染试剂的方式消除。 图注：20 ng (500 fmol)兔骨骼肌肌动蛋白经胰酶

哪位做过免疫动物，请多指教

抗体效价，当效价>1:16时，于放血前4d加强免疫1次，然后采血并分离血清. 方法二：：纯化的Hexon protein (0.5mg/ml ) 1ml加入等体积的弗氏佐剂 进行乳化，采用颈部皮下多点注射的方法. 以后每隔两周加强免疫1次，抗原改用福氏不完全佐剂配制，用量同前，在每次加强免疫7d后，用免疫双扩散实验检测抗体效价，当效价>1:16时，于放血前4d加强免疫1次，然后采血并分离血清. 兔的取血： １．  颈静脉取血 　　将兔固定于兔箱中，倒置使头朝下，在颈部上１／３的静脉部位剪