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上海富雨生物
磷脂酶 A2(phospholipase A2,PLA2)试剂盒
测定原理
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC)产生游离巯基,与DTNB反应生成黄色物质,在412nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×5 瓶,-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入 1.8mL 试剂二充分混匀。(3天使用完)
样品处理
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g 离心5min,取全部上清于4℃、100000g 离心 30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
3. 血清:直接测定。
测定操作
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对照管 |
测定管 |
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样品(μL) |
20 |
20 |
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试剂二(μL) |
180 |
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试剂三(μL) |
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180 |
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充分混匀,37℃反应 10min,于微量石英比色皿/96 孔板,蒸馏水调零,测定 412nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管- A 对照管 | ||
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文献和实验Analysis of the effect of PECAM1 on the migration and invasion of gastrointesti- nal stromal tumor cells based on single-cell transcriptome sequencing data 期刊:MODERN ONCOLOGY,Aug.2023,VOL. 31,No. 16 作者:HU Wu1,WEN Yiqiao2,QIN Jialan1,ZHAO Ying3,ZHANG Tianbiao1 DOI:10.3969 /j.issn.1672-4992.2023.16.003
亦称为卵磷脂酶( lecithinase或 lecithase)。在水解卵磷酯和其它磷脂的酶中,有水解如图所示 A1 、 A2 、 B、 C、 D位置的各种酶,对此分别称为磷脂酶 A1 , A2 , B, C, D:( 1)磷脂酶 A2 : EC3. 1. 1. 4.存在于眼镜蛇属( Naja)、蝰蛇( Vipera)、响尾蛇( Crotalus)等蛇毒及蜂、蝎的毒液中,分解卵磷酯,生成溶血卵磷酯,而出现溶血作用。也存在胰脏、肝脏、小肠等动物组织中,酵母、植物中
Phospholipases A2 (PLA2 s) are important enzymes in signal transduction, being responsible for release of arachidonate from membrane phospholipids for the production of prostaglandins, leukotrienes, platelet-activating factors
Efficient Immobilization of Phospholipase A2
Immobilized enzymes have been widely used for biomedical and industrial applications. Since phospholipase A2 (PLA2 ; E.C.3.1.1.4) catalyzes the hydrolysis of a wide range of phospholipid aggregates, immobilized PLA2 should also have potential
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