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文献和实验:94℃5 min, 72℃6 min。取4μl PCR扩增产物和1μl 溴酚兰上样缓冲液在1. 5%琼脂糖凝胶上电泳,电压4V / cm,电泳2h[ 3 ] 。2 结果2. 1 质粒DNA的定量及杂质检测 表2结果显示:是否使用溶液Ⅰ对实验基本上没有影响,溶液Ⅱ中的NaOH直接关系到所提取质粒DNA 的量,溶液Ⅲ中的醋酸钾主要是与SDS (十二烷基硫酸钠)作用生成PDS(十二烷基硫酸钾) ,从而使大部分蛋白质沉淀。表2 不同方法提取的质粒DNA的吸光度2. 2 质粒DNA经sma I单酶切后电泳
发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 一、材料与试剂 凋亡细胞; 蛋白酶K(500μg/ml) 8mol/L 醋酸钾 白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。 氯仿 无水乙醇,70%乙醇; 2%琼脂
7.5)(3)白细胞裂解液:pH8.0,10mmol/L Tris-HCl,10mmol/L NaCl,10mmol/L EDTA,1% SDS。(4)蛋白酶K(5)8mol/L的醋酸钾(6)氯仿(7)无水乙醇及70%乙醇(8)高速离心机及离心管(9)加样器及吸头 [操作步骤](1)取1.5ml离心管,加入500ul新鲜或冻存全血(用EDTA或枸橼酸钠抗凝,不要用肝素抗凝,因为肝素抑制Taq多聚酶的活性),与红细胞裂解液或双蒸水1ml,颠倒数次混匀;(2)3000rpm离心2分钟,弃上清;(3)加入
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