缓冲甘油-氯化钠溶液

免疫荧光技术你真的会吗？

一、直接免疫荧光法（一）基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。（二）试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份

标准菌株验证鉴定步骤

菌种活化：干粉标准菌株 标准贮备菌株 工作菌株；   1.1    金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株： 挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃ 培养18-24 小时。并观察菌落形态。 a. 金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明； b. 大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色； c. 铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素； d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明

免疫荧光实验

一、直接法 1．标本经固定后，PBS洗涤3×3分钟。 2．加荧光素标记的抗体，湿盒内37℃孵育50分钟。 3．PBS洗涤3×3分钟。 4．0.1％伊文氏兰复染。 5．PBS洗3次，蒸馏水洗2次，每次3分钟，以除去NaCl结晶。 6．缓冲甘油封片，镜检。 二、间接法 1．标本固定后，PBS洗涤3×3分钟。 2．滴加一抗，37℃ 40分钟或4℃过夜。 3．PBS洗涤3×3分钟。 4．滴加荧光标记二抗37℃ 40