抗荧光衰减封片剂(PVP,含DAPI)

一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

PBST， 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min，共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中孵育1h后，回收二抗，接着用PBST洗3次，每次5 min；由于荧光容易淬灭，故从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都要避光。  6. 复染核（定位的关键） 在玻片上滴加DAPI，并注意避光孵育5min，对标本进行染核，然后用PBST洗3次，每次5min，洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察

免疫荧光实验指南

纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察采集图像。

荧光的淬灭及抗淬灭

剂。如卤素离子、重金属离子、具有氧化性的有机化合物(硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物和羟基化合物)及氧分子等。 2)荧光的抗淬灭：标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准确的光束，与普通荧光显微镜相比，标本的光漂白作用更为明显，荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。因此，应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine，PPD)、n-丙基