5×蛋白上样缓冲液(还原性)TCEP

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。2. 吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；每 5×106 细胞/60 mm 培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml）。3. 用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。4. 在 4 ℃ 下持续搅拌 30 分钟。5. 在 4 ℃ 预冷的离心机中以 16000 × g 的转速离心 20 分钟。6. 轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清

淀粉酶的活力测定及专一性实验

-呋喃果糖的C2之间的糖苷键。 蔗糖无还原性，淀粉的还原性也极小，它们对3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）呈阴性反应，而唾液淀粉酶（主要含a-淀粉酶）水解淀粉后的产物则为还原性糖，与DNS试剂共热呈阳性反应，产生红棕色。据此可以检验蔗糖和淀粉有无被唾液淀粉酶水解，从而了解酶作用的专一性。 酶活力也称酶活性，是以酶在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。本实验是以一定量的唾液淀粉酶液，于37°C、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间里将淀粉转化为还原

DTT特性与保存及其在蛋白纯化和保存中的作用

分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近。但DTT价格略高一些。DTT粉末的一般保存条件：-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。 由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP