WB 一抗/二抗稀释液(2×)in PBS

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

：蛋白质样本和生物素标记的蛋白marker标准经SDS-PAGE后转于印迹膜上，然后经一抗→HRP 标记的二抗→HRP催化LumiGLO试剂发生反应并产生荧光→显影于X-光片上。其基本原理如下图： 3.1 主要试剂配制 10×转移缓冲液(transfer buffer)：30.3 gTris-Base，144.1 g Glycine，500 ml三蒸水，振荡混匀后，定容至1000 ml，4℃备用。用时用0.1 M磷酸缓冲液即1×PBS和甲醇稀释至1倍，使甲醇的终浓度

WB操作规程

转移槽。 ⑥将冰盒装入缓冲液槽，注满4℃预冷的转移缓冲液。 ⑦将整个装置放在磁力搅拌器上并开始搅拌，连接好转移电极恒压100V转移90min，若转移过夜则恒压30V。 ⑧电转完毕后，将NC膜置于5%的脱脂奶粉（PBS配制）中封闭，37℃2小时或4℃过夜。 5．免疫检测 一抗与靶蛋白的结合 ① 封闭的膜用PBST漂洗2-3次。 ② 将加样槽洗涤干净，用蒸馏水润洗，晾干，将膜用一次性手套覆盖好，按标记

巴傲得生物-WB实验流程

5% （ W/V ）脱脂奶粉，用 TBS 稀释 10 一抗稀释液 2% （ W/V ） BSA ，用 TBST(0.1% （ V/V ） Tween-20) 稀释 11 二抗稀释液 2% （ W/V ）脱脂奶粉，用 TBST(0.1% （ V/V ） Tween-20) 稀释 二 提取蛋白： 1 把培养皿置于冰上，倒掉培养液，并用 PBS 洗涤细胞，然后弃去洗液。 2 将 1ml 细胞裂解液（配方如下所示）加入