10×电泳转移缓冲液(转膜液)(粉剂)

Western 实验步骤

80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V)，以达到更好的浓缩效果，使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳，电泳时间约 2-3 小时。 电转（湿转法） 1） 电泳结束后取出凝胶，在电泳缓冲液中（冷藏的）漂洗数秒。按“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫，再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸），将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上，去除气泡，夹好电

western blot注意事项

1-3 张用转移缓冲液浸泡过的滤纸，逐张叠放，对齐，然后用一玻璃棒作滚筒以挤出所有气泡，必要时可滴加转膜液润湿。 c. 取出浸在转膜液中的凝胶平放于滤纸上。排除所有气泡。 d. 把硝酸纤维素滤膜放在聚丙烯酰胺凝胶上，在硝酸纤维素滤膜与聚丙烯酰胺凝胶之间不留有气泡。 e. 把最后 1-3 张滤纸放在硝酸纤维素滤膜上方，同样须确保不留气泡。其实，用玻棒给点压力很容易排除气泡。 f. 放上另一张或几张海绵垫片，盖上阳极板，夹紧。保证对凝胶有一定的压力。 4）连接电源。我做 90KD 的蛋白

Western Blot 相关技术操作与原理

以上。（注意：必须保 证NC 膜始终完全浸于转移缓冲液中） 2 ．剪裁与胶同样大小的6 层滤纸，用转移缓冲液浸泡后待用； 3 ．取下电泳板，将其平置（使“ 凹” 面玻璃板在下），小心取出夹板中的垫片及去掉 上层玻璃板，切除多余凝胶，将含样品胶用1× 转膜液漂洗一次。 4 ．转膜 ① 将样品胶与膜装入标有正、负极的转膜夹板中：由阴极侧开始，依次为海绵垫片 →3 层滤纸→ 样品胶→NC 膜→ 三层滤纸（注意：排除气泡）→ 海绵垫片，扣紧转膜夹板，放入含有转膜缓冲液的转移电泳槽中（见蛋白质转移示意