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文献和实验r/min)20rain,除去其中少量的沉淀物,装入透析袋中,再置于烧杯中,用pH8.0缓冲盐水透析(0~4~C)过夜。⑤过柱 取透析过夜的标记物,通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G—50柱,分离游离荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2);过滤量:12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析);收集量:20ml(稀释1.7倍左右)。2.Chadwick法(1)试剂和材料 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%碳酸钠水溶液、0.01mol/L
免疫荧光组织(细胞)化学技术系列四:荧光素及其标记抗体的方法
标记抗体的方法1、FITC标记抗体的方法(1)Marsshall氏法材料:抗体溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25-50ml) 、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2的0.01mol/L PBS葡聚糖凝胶G-25层析柱等。方法及步骤:①抗体的准备:取适量已知抗体浓度之溶液,加入三角烧瓶中,再加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最后抗体浓度为20mg/ml,碳酸
只有异硫氰酸荧光素(FITC),丽丝胺罗丹明B200(RB200)。 2. 常用的荧光色素 (1)异硫氰酸荧光素 :又称异硫氰酸荧光黄,纯品为橙黄色粉末。分有结晶型与粉末型两种,结晶型荧光强度大、稳定、优于粉末型。分子式C21H11O2N5、分子量389,溶于水,易溶于pH8-9.5碳酸盐缓冲液中。最大吸收波长为495 nm。最大发射波长520 nm。异硫氰酸荧光黄性质稳定,于低温下可保存二年以上,但久置标记抗体能力弱,荧光亮度差,故应采用新产品。异硫氰酸荧光素借助
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