71618 Script IV RT MasterMix (

Script IV RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

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产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 12 个月。

产品简介

Script IV RT MasterMix采用第四代高达60℃的全新高温逆转录酶，可以通读GC含量丰富，二级结构复杂的RNA模板，极大提高了逆转录效率，CT值一般提早2-3个循环。

5x RT Mix IV为一管式逆转录预混液，含有逆转录所需的所有试剂（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，针对qPCR进行特别优化oligodT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，zui大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。

适用范围

第一链cDNA合成，尤其高GC含量，复杂模板的cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

注意事项

1． 避免RNase污染。

2． 为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。

3． 5x RT Mix IV含有甘油比较粘稠，容易吸附在管壁和吸头外，导致损失， 使用前请点甩离心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶过量，即使每次分别按照3.8 μl使用，也不影响使用效果。

4． 20 μl逆转录反应体系建议加入不超过1μg的Total RNA。如果目的基因的表达量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否则，RNA量过高，可能会超出后续qPCR的线性范围。

5． 本产品适用于包含Ploy (A)结构的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。

6． 如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5 min后迅速转移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混匀，50°C孵育15 min进行逆转录。

第一连 cDNA 合成 (以 20 μl 反应体系为例)

重要提示：操作前，请将各组分轻弹混匀，点甩离心后置冰上备用。

1． 反应体系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下组分：

2． 轻柔吸打混匀，50℃孵育15 min，进行逆转录反应。

3． 85°C加热5 sec，终止反应。

逆转录产物可立即用于qPCR反应，或保存于-20°C，并在半年内使用；长期存放，请分装后存于-70°C。

qPCR

建议取1~2μl cDNA产物原液作为20μl qPCR反应体系的模板。

如果基因表达量比较高，请根据实际情况适当稀释cDNA模板后使用。

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