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- 北京
- 2025年07月13日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
2× KOD PCR Master Mix (含染料)
目录号:71517
产品内容
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产品成份 |
71517-05 |
71517-0100 |
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2× KOD PCR Master Mix |
5× 1 ml |
100× 1 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNAPolymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
KOD扩增的PCR产物为平末端（Blunt），可直接用于Blunt载体克隆（Cat#V116、V117）
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 100-138bp/sec！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × KOD PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20 μl Reaction |
50 μl Reaction |
终浓度 |
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2× KOD PCR Master Mix |
10 μl |
25 μl |
1 × |
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Forward Primer(10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Reverse Primer(10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Template DNA |
<0.2 μg |
<0.5 μg |
as required |
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ddH2O |
up to 20 μl |
up to 50 μl |
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参考模板用量：（以 50 μl 反应体系为例）
质粒：0.1-10 ng；
细菌基因组：10-100 ng；
人类基因组：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：用 ddH2O 补足反应体系（体积）至 50 μl。实际操作中，首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，然后将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initialdenaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
20-30 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
50-60℃ |
20-30 seconds | |
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Extension |
72℃ |
1-4kb / minute | |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果扩增片段小于 4 kb，建议 KOD 酶的延伸速度为 1kb / 15 sec；
如果扩增片段大于 4 kb，建议延伸速度为 1kb / 20-30 sec。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
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文献和实验Protocol for mRNA amplification--RT-PCR实验过程
on ice. Add to PCR Tube (separately or in a Master Mix) Ammt Reagent 4ul 5X First strand buffer 1ul
的接头区，这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。 至于设计软件，PRIMER3，PRIMER5，PRIMER EXPRESS都应该可以的。做染料法最关键的就是寻找到合适的引物和做污染的预防工作。对于引物，你要有从一大堆引物中挑出一两个能用的引物的思想准备---寻找合适的引物非常不易。 五、cDNA与引物质量检测 取0.2 ml薄壁PCR管，编号。向各管中加入含染料2×PCR TaqMix10 ul；加入正反向引物各0.5 ul（引物浓度10 uM
DNA结合的引物长度足够的条件下，其5’端碱基可不与模板DNA互补而呈游离状态，因此可在引物5’端加上限制性内切酶位点、启动子序列或其它序列等以便于PCR产物的分析克隆等，引物的5’端最多可加10个碱基而对PCR反应无影响。 PCR反应系统总体积10 μl，模板DNA的量为植物总DNA 10 ng。 PCR反应体系(10 μl) 各对引物的复性温度不一样，用x代替。延伸时间用y代替，其中片断长度如果大于1kb，y为1.5 min；大于2kb，y为2.0 min；片断长度如果小于1kb，y
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