71516 KOD DNA Polymerase（含超纯dN

KOD DNA Polymerase (含超纯 dNTP)

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产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 2 年。

产品简介

KOD DNA Polymerase 是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物，扩增所得的DNA为平末端，可直接用于Blunt (平末端)载体克隆（Cat#V116、V117），也可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

活性单位:

KOD DNA Polymerase 活性定义为在 75°C 活性测定条件下，在 30 min内摄入 10nmoles 的 dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。

质量控制:

SDS-PAGE 检测纯度大于 99%，经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余 DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

适用范围：

用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。

注意事项：

高保真KOD对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。

KOD DNA Polymerase的使用说明：

一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)

参考模板用量（50 μl 反应体系）：

质粒：5-20 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-100 ng；cDNA：1-2 μl 。

注意：用 ddH2O 补足反应体系（体积）至 50 μl。实际操作中，首先要计算好需要补加ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，然后将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。

二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）

注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C

如果扩增片段小于 4 kb，建议 KOD 酶的延伸速度为 1kb / 15 sec；

如果扩增片段大于 4 kb，建议延伸速度为 1kb / 20-30 sec。

三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。