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鲑鱼胚胎细胞;CHSE-214实验要点及说明
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
以下是草鱼肝脏细胞;L8824品牌详细说明:
产品名称:鲑鱼胚胎细胞;CHSE-214
产品类别:其他细胞系
生长特性:贴壁生长
培养体系:MEM+10%FBS,28°或者21°培养
细胞形态:上皮细胞样
规格:1×10^6cells/T25培养瓶
货号:YS-01X8561
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 鲑鱼胚胎细胞;CHSE-214由长江水产所建立鉴定,用于草鱼基础研究和病毒疾病防治研究。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:
3传代,2-3天传一代
传代情况 C15
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR STR鉴定
同工酶
染色体
使用权限 A类
鲑鱼胚胎细胞;CHSE-214品牌培养操作步骤
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
草鱼肝脏细胞;L8824品牌冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
鲑鱼胚胎细胞;CHSE-214品牌15-epi Prostaglandin A1 (500 ug)15-epi PGA1; 9-oxo-15R-hydroxy-prosta-10,13E-dien-1-oic acid
Simvastatin (10 mg)MK 733, Simvastatin, 2,2-dimethyl-1S,2,3R,7S,8S,8aR-hexahydro-3,7-dimethyl-8-[2-[(2R,4R)-tetrahydro-4-hydroxy-6-oxo-2H-pyran-2-yl]ethyl]-1-naphthalenyl ester, butanoic acid
8-iso-16-cyclohexyl-tetranor Prostaglandin E2 (5 mg)8-iso-16-cyclohexyl-tetranor PGE2, 8-iso-16-cyclohexyl-tetranor Prostaglandin E2, 9-oxo-11.alpha.,15S-dihydroxy-(8.beta.)-16-cyclohexyl-17,18,19,2-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic
Jurkat cell Lysate (untreated)Jurkat cell Lysate (untreated)
Coelenterazine (1 mg)Luciferin (Oplophorus)|Preluciferin (Watasenia); 6-
BW 246C (50 mg)8-epi BW 245C, BW 246C, (4R)-(3-[(3R,S)-3-cyclohexyl-3-hydroxypropyl]-2,5-dioxo)-4-imidazolidineheptanoic acid
Coenzyme Q10 (200 mg)Ubiquinone-1|CoQ1|NSC 14865|Ubidecarenone, Coenzyme Q10, 2-[(2E,6E,1E,14E,18E,22E,26E,3E,34E)-3,7,11,15,19,23,27,31,35,39-decamethyl-2,6,1,14,18,22,26,3,34,38-tetracontadecaen-1-yl]-5,6-dimethoxy-3-methyl-2,5-cyclohexadiene-1,4-dione
-hydrochloride) (100 mg)Centroton|Thymergix|Valerophenone, -hydrochloride), 1-(4-methylphenyl)-2-(1-pyrrolidinyl)-1-pentanone, monohydrochloride
5-IKK-ε Kinase Inhibitor II
(±)5,6-DHET (50 ug)(±)5,6-dihydroxy-8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid; (±)5,6-DiHETrE; (±)5,6-DHET
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文献和实验值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。16.IPTG溶液 【配制方法】 IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。 17.1mol/L乙酸镁溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。 18.1mol/L MgCl2溶液 【配制
【配制方法】 IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。 17.1mol/L乙酸镁溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。 18.1mol/L MgCl2 溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解203.4g MgCl2 ・6H
产物中的Dcr-2和R2D2水平正常。然而,遗传缺失Dcr-1的果蝇胚胎细胞,无论是dsRNA还是siRNA触发的RNAi效应都会下降。很可能是在没有Dcr-1的情况下,RNAi途径所需的其它组分并不稳定,而不是Dcr-1自身是siRNA引导的RNAi所必需的。有外源siRNA存在于溶解产物时,Dcr-1,Dcr-2,和R2D2与80S复合体共沉降,提示它们存在于一个完整的RISC装配体中,这一装配体可以将siRNA和miRNA装配进RISC[203]。与这一观点一致,RISC核心蛋白AGO2及辅助
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