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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
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30
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1-2年
- 供应商：
深圳顺辰生物科技有限公司
- 保存条件：
常温/冷冻
微量蛋白质定量试剂盒 (BCA 法)
产品描述：
Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：
(1) BCA Reagent 100ml，室温保存；
(2) Cu Reagent 2.5ml，室温保存；
(3) BSA standard 4mg/ml 1ml，−20ºC冻存。1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1ml比色杯测定。
所需设备：
比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562nm，可在540-590nm之间。
注意事项：
1. 37ºC 30min或25ºC室温反应2小时对测量较为便利，但严格来讲此时反应尚未达到终点，通常每10min OD562值升高约2.3%。然而，通常在10min内可以测定30管而不明显影响测定精度；
2. 微量蛋白质定量试剂盒 (BCA法)检测范围为1~100µg/ml；
3. BCA法在样品含有脂类时光吸收值偏高。样品中EDTA或葡萄糖浓度大于10mM不能使用BCA方法，葡萄糖浓度大于10mM时可用改良Lowry法蛋白定量试剂盒#P1512，EDTA大于10mM的样品可用Bradford法蛋白质定量试剂盒(#P1510)。另外，蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂(#P1255)沉淀后，可彻底去除干扰BCA法、Bradford法、和Lowry法蛋白测定的物质；
4. 欲使测量能耐受下面表2所提示的最大干扰物质浓度，并保持测量精度，应在蛋白标准管中加入相应浓度的干扰物质，但会给操作带来不便；
5. 可测量吸附于固相支持物乳酶标板、琼脂糖、亲和层系凝胶上的蛋白；
6. 每次测定应该制备单独的标准曲线。
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文献和实验BCA 蛋白定量法是实验室常用的蛋白质定量方法。Invent 所有蛋白提取试剂盒提取的蛋白均可使用 BCA 法进行定量！那么今天小编就手把手的教大家该如何用 BCA 来定量！BCA 法原理碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+，Cu+与 BCA 试剂相互作用形成紫色的络合物，该水溶性的复合物在 562nm 处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。实验操作具体步骤1. 梯度稀释牛血清白蛋白（BSA）标准品（具体操作按试剂盒中说明
法是十分常用的蛋白质比色定量方法，很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质的固有的280nm吸收峰检测，BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性，消除了核酸的干扰，核酸干扰在对细胞裂解物或其他生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下，蛋白将Cu2+ 还原为Cu+ ，Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物，如图1，其吸光值与蛋白浓度成正比。测定在562nm 处的吸收值，并与标准
形成紫色络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 现对这两种方法进行比较： 一、实验材料： 细胞总蛋白提取试剂盒（AR0103） M231 BCA蛋白定量试剂盒（AR0146） Commassie改良增强型蛋白质定量试剂盒（AR0145） 二、操作步骤： Commassie法： 1.将BSA冻干标准品（10mg/支）用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml，1000 ug/ml,500
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