考马斯亮蓝法蛋白质定量试剂盒（Bradford法）

考马斯亮蓝法蛋白质定量试剂盒（Bradford法）
产品描述：
考马斯亮蓝蛋白定量法又称Bradford法，是最常用的蛋白质快速定量方法之一。考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue G-250)与蛋白质结合后染料的最大吸收峰由465nm变为595nm，溶液的颜色由棕色变为蓝色，在595nm波长下测定的吸光度值与蛋白含量成正比。灵敏度比Lowry法高4倍，与BCA法相当。反应迅速，2分钟达到平衡并在1小时内保持稳定。操作简便，只需要一种反应试剂。干扰物质少，K+、Na+、Mg2+离子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、(NH4)2SO4、乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。本试剂盒采用改良Bradford法和优化的试剂组成以及优化的测定方案，可对0.5-4000µg/ml浓度范围的蛋白进行线性检测，显著提高了蛋白检测灵敏度。提供的5 ´ 染料浓缩液可进行400次标准2ml比色杯检测，或2666次微板检测。
组成与储存： 
（1） 5´Coomassie浓缩溶液 100ml 室温或4ºC储存；
（2）牛血清白蛋白标准品(BSA) 4.0mg/ml溶液 1ml −20ºC储存。
所需设备：比色计或酶标仪、微板比色仪，工作波长为595nm±5nm (见说明1)。
注意事项：
1. 分别在工作波长为595nm和450nm测定OD值，计算OD594/OD450，以此代替原有的OD595作图，可明显提高检测的精确度和灵敏度约10倍，显著提高测定的线性关系，并降低去垢剂的影响。在进行超敏感度测定时可考虑此法；
2. 主要干扰物质的终浓度：SDS<0.002%；Triton X-100<0.1%；Tween-20/60/80<0.015%；NaOH<0.1N；
3. 蛋白-染料结合物在1小时内保持稳定，但在5-20分钟内稳定性最好，因此应尽快测定。如果放置过久将出现沉淀，或使测定结果偏低；
4. 染料不结合精氨酸、赖氨酸及分子量小于3kDa的短肽，所以不同的蛋白质由于精氨酸和赖氨酸含量不同会出现小范围的测量偏差；小于3kDa的短肽纯品不能用此方法测定；
5. 染料-蛋白结合物附着在石英比色皿后难以洗去，因此不宜使用石英比色皿。可用玻璃或塑料比色皿，用后立即用95%乙醇或洗涤剂浸泡洗涤。塑料比色皿不可用乙醇长时间浸泡；
6. 标准曲线应该每次新做。但每一稀释度的BSA标准品可预先配好-20ºC冻存备用，注意在使用这种非新鲜配制的BSA时，如果发现标准曲线的某一些点偏差较大，说明稀释的BSA已经坏掉应予重配；
7.  Bradford法物质干扰及耐受的最大浓度参见公司网站pdf文件。