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- 爱必信(Absin)
- 中国
- abs50131
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 供应商：
爱必信（上海）生物科技有限公司
- 规格：
48T
| 描述 |
三磷酸腺苷(ATP)是生物的能量通货，由糖酵解或线粒体内三羧酸循环及电子传递链产生，是细胞内能量的源泉。通常情况下，ATP 与二磷酸腺苷(ADP)会互相转化，ATP 与 ADP 的比值变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常作为细胞活性的检测指标。
ATP 与荧光素在荧光素酶的催化下，反应发出荧光，再用酶将 ADP 转化为 ATP,采用相同的原理检测 ATP，即可算出细胞内的 ATP/ADP 的比值。 产品组成：
1、试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。 2、对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 应用 |
糖脂代谢;能量代谢
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| 产品用途 |
本试剂盒适用于检测细胞样本中 ATP 与 ADP 的比值，从而分析细胞状态。
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| 使用方法 |
一、所需自备物品：
仪器：化学发光检测仪或多功能酶标仪（具有检测化学发光的功能）、恒温培养箱 二、试剂准备： 1、检测前，试剂盒中的试剂平衡至25℃。 2、试剂二工作液的配制； 取一支试剂二，加入1 mL试剂三溶解，未用完的溶液，分装后-20°C可保存一个月。 3、酶工作液的配制： 按试剂二工作液：试剂三=1 : 5的体积比配制，按需配制，现用现配。 4、反应工作液的配制： 取一支试剂四，加入1.49 mL试剂一溶解，再加入10 μL试剂五，涡旋混匀，现用现配。 三、样本准备： 1、样本处理 细胞样本：取收集好的细胞按照每1×10^6个细胞，加入150 μL试剂一（2mL EP管），盖紧混匀后，插在浮漂上放入沸水中水浴10 min，流水冷却后，4°C，10000 × g离心10 min，取上清液，置于冰上待测。 四、实验关键点： 1、避免试剂二工作液反复冻融，可分装后-20°C保存。 2、一次性检测孔数需控制在30个以下。 五、操作步骤： 1、 测定孔：取 100 μL 酶工作液，加入到相应的酶标孔中，25℃静置5 min，在化学发光检测仪上，测定各孔发光值 L1。 2、向步骤1中各孔加入 20 μL 待测样本，振板 5 s，立即在化学发光检测仪上测定各孔发光值 L2。 3、将步骤2中的各孔 25℃静置 20 min，使用化学发光检测仪检测各孔 发光值 L3。 4、向步骤3中的各孔加入 50 μL 反应工作液，25℃静置 6 min。 5、振板 5 s，在化学发光检测仪上检测各孔发光值 L4。 六、结果计算： ATP/ADP 比值的计算公式： ATP/ADP 比值=（L2-L1）/（L4-L3） 注解: L1：黑色酶标板背景发光值 L2：加入样本后体系的发光值（ATP 发光值= L2–L1） L3：加入 ADP 转化酶前体系的发光值 L4：加入 ADP 转化酶后体系的发光值（ADP 发光值= L4–L3） | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 基本信息 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 |
-20°C避光条保存，有效期6个月。
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文献和实验不向叶绿体悬浮液中加磷酸化底物，而断光时再加入底物能形成ATP的实验。１９６２年，中国的沈允钢等人，用此实验探测到光合磷酸化高能态(Z*)的存在。1963年贾格道夫(Jagendorf)等也观察到了光合磷酸化高能态的存在。起初认为Z*是一种化学物质，以此提出了光合磷酸化中间物学说。现在知道高能态即为膜内外的H+电化学势。所谓两阶段光合磷酸化，其实质是光下类囊体膜上进行电子传递产生了跨膜的H+电化学势，暗中利用H+电化学势将加入的ADP与Pi合成ATP。 图4-16 酸-碱磷酸化实验示意 ②酸
呢?推测如下： 1.回收碳素 通过C2碳氧化环可回收乙醇酸中3/4的碳(2个乙醇酸转化1个PGA，释放1个CO2)。 2.维持C3光合碳还原循环的运转 在叶片气孔关闭或外界CO2浓度低时，光呼吸释放的CO2能被C3途径再利用，以维持光合碳还原循环的运转。 3.防止强光对光合机构的破坏作用 在强光下，光反应中形成的同化力会超过CO2同化的需要，从而使叶绿体中NADPH/NADP、ATP/ADP的比值增高。同时由光激发的高能电子会传递给O2，形成的超氧阴离子自由基O-·2会对光合膜、光合器有伤害作用
酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cGMP的含量。cGMP特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病，比如cGMP特异性磷酸二酯酶类型5的抑制剂（伟哥和***）被用来治疗ED（勃起功能障碍）；腺苷酸环化酶将ATP催化生成cAMP，cAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP。激活腺苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cAMP的含量。腺苷酸环化酶激活受体的阻断剂和cAMP特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病，比如针对升高cAMP水平的b-肾上腺素受体的阻断剂被用于治疗心律失常、高血压、心肌
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