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99
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爱必信(上海)生物科技有限公司
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1g
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文献和实验减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。 通常用 0.45μ m 和 0.2μm 两种规格的 NC 膜。 大于20kD 的蛋白可用 0.45μm 的膜, 小于 20kD的蛋白就要用 0.2μ m 的膜了, 如用0.45μ m 的膜就会发生“Blowthrough”的现象。PVDF 膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高,非常适合于低 分子量蛋白的检测。但 PVDF 膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和 1-5 秒钟。 蛋白质常用的转移方法主要有两种:槽式湿转和半干转移。前者操作容易
Welchrom® BRP GLASS( 500 mg/6 mL) (1) 活化:依次加入6 mL甲基叔丁基醚和6 mL甲醇,6 mL水平衡。 (2)上样:500 mL样品加入小柱中,流速≤15 mL/ min,流出液弃去。 (3) 淋洗:3 mL 5%甲醇水溶液淋洗,淋洗液弃去。 (4)洗脱:3 mL甲醇和6 mL甲基叔丁基醚洗脱,收集洗脱液。 (5)重新溶解:30℃下将洗脱液减压蒸馏至干,1 mL乙腈溶解残渣,滤膜过滤后HPLC分析。 注:(5) 步骤是供参考的,使用
-8(WST-8)等。 现就这三种四氮唑盐类方法作一个简单介绍: 1、MTT法 MTT: 化学名: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的 蓝紫色结晶甲 (Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲 ,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活
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