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爱必信(上海)生物科技有限公司
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10g
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文献和实验FISH操作前为石蜡包埋组织切片推荐的预处理程序试剂:2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane, Sigma)、丙酮、二甲苯、酸性亚硫酸钠(sodium bisulfite )、蛋白酶K、2XSSC、0.1M HCl、70%乙醇、85%乙醇、100%乙醇预处理程序:1. 将载玻片浸入2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO
没食子酸盐(propyl gallate,NPG)、1,4-二偶氮双环[2,2,2)-辛烷(1,4-diazobicyelo(2,2,2)-octane,DABCO)等。其中p-苯二胺是最有效的抗淬灭剂,但由于对光和热均有较强的敏感性,且具有毒性,因而限制了在体内的应用。理想的PPD抗淬灭剂混合液配方是:9份甘油、1份PBS和浓度在2~7retool/L之间的PPl),最终pH为8.5~9.0。n-丙基没食子酸盐无毒性,对光和热稳定,但抗荧光漂白的效果不如PPl),可用于体内研究。推荐浓度为3~
蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)。下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。1、pH值蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐
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