NLuc荧光素酶检测试剂盒

NLuc荧光素酶是一种经基因工程改造的小分子酶（19.1kDa），是性能卓越的生物发光报告基因蛋白。 它比萤火虫（Photinus pyralis）或海肾荧光素酶亮约 150 倍，使用一种新型的腔肠素类似物（Furimazine） 可产生高强度、辉光型发光信号。该发光反应不依赖 ATP，同时通过抑制本底发光信号而获得最高的检测灵敏度。
NLuc Reporter Gene Assay Kit提供了一种简单的、可单次添加的试剂，具有灵敏度高的特点，它可在 NLuc萤光素酶存在的情况下产生较强信号。
产品组分：

组分	名称	500T
A	NLuc检测缓冲液	50mL
B	NLuc检测底物（50×）	1mL

1、自备材料：
PBS；多道排枪；白色不透光/黑色细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
2、检测前准备：
（1）预先将NLuc检测底物（50×）和NLuc检测底物缓冲液放置于室温。
（2）根据实际使用量，以1:50的比例将适量的NLuc检测底物（50×）与NLuc检测底物缓冲液混匀，室温避光备用。例如：如果需要10 mL反应液，则需要加入0.2 mL的检测底物。
注：建议现配现用，剩余的含有新型底物的反应液在当次实验结束后不建议留存。
3、操作方法：
（1）从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5-15 min，恢复至室温。
注：使用白色不透光或者黑色的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
（2）加入检测溶液
使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的反应液，加样体积与细胞培养液体积相同并混匀。例如，96孔板通常加入80-100μL 培养液，相应加入80μL-100μL检测溶液；384孔板通常加入20-30μL 培养液，相应加入20-30μL检测溶液。
（3）发光检测
混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测NLuc荧光素酶报告基因活性。
注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后1小时内完成检测。
4、分析数据：
（1）实验设计：根据不同实验目的，在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性，理论上每个实验组（包括对照组）都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。
①空白对照组：
背景F：未转染细胞+反应液。
注：空白对照组的样品量必须与实验样品量相同，包含与实验样品相同的培养基/血清组合，并加上完全相同的检测试剂。
②实验组：转染细胞经实验化合物处理（即实验组F）。
③对照组：转染细胞不经处理，用以标准化结果（即对照组F）。
（2）计算结果：
实验组=实验组F-背景F。
对照组=对照组F-背景F。
表达倍数=实验组/对照组。