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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
上海淳麦生物
- 适应物种:
人/大鼠/小鼠等各类物种
- 样本:
血清 细胞等
- 规格:
48T/96T
产品名称:Ras同源基因家族成员A(RHOA)ELISA试剂盒
用途
该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分Ras同源基因家族成员A(RHOA)ELISA试剂盒需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP 管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器
Ras同源基因家族成员A(RHOA)ELISA试剂盒储存及有效期:
1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC,避免潮湿。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
Ras同源基因家族成员A(RHOA)ELISA试剂盒标本的采集与保存:
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜,然后1000×g 离心20 分钟,取上清即
可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟,
取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:
1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后
再匀浆);
2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2 次)。
3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。
4、细胞裂解液:
1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);
2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):
i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。
4)将标本于2-8oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。
5、细胞培养上清或其它生物标本:请1000×g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保
存,但应避免反复冻融。
注意:
1、以上标本均需密封保存,4oC 保存应小于1 周,-20oC 不应超过1 个月,-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
Ras同源基因家族成员A(RHOA)ELISA试剂盒操作步骤:
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1.Add 100 μL of standard or sample to each well. |
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2.Remove the liquid. |
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3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times. |
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4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times. |
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5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃. |
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6.Add 50 μL of Stop Solution. |
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7.Read the OD at 450 nm immediately. Calculation of the results. |
上海淳麦生物是专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的专业性生物科技公司。本着服务科学的理念,赛泓瑞建立了生命科学研究工具的研发、生产、销售及技术服务平台,现已有数万余种产品,并每年不断开发新产品,为广大的生命科学研究人员、医学、药学、农业、环保等的科研人员提供科研工具性产品及技术服务.
经营范围:ELISA试剂盒、原代细胞和细胞株、化学试剂、蛋白、抗体、分子试剂和试剂盒。
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文献和实验莲芯 请各位高人指点,在RhoA-ROCK信号通路中,如何用实验解析RhoA是怎么活化的呢,并且ROCk是如何参与细胞运动的.十分感谢!急呀! dianaofyezi 可以购买相应的试剂盒进行检测活化后的RHO-A蛋白。 doctormy "如何用实验解析RhoA是怎么活化的呢",如果我没理解错的话,你的意思是解释和分析,这是试验设计的基本问题,只有结合你的课题具体思路去设计解释。
用RhoA抗体检测沉淀物中RhoA-GTP含量。试剂盒是upstate及cytoskeleton公司都有。但是区别upstate测的是活性Rho,而细胞骨架公司的测的是活化的RhoA。看了说明书,操作中要液氮,要低温,要保持RhoA的活性不被降解,而且试剂盒贵,1万元左右。 4、看了还有G-LISA的方法,用抗体与活化的RHOA结合的原理。用的是抗GTP-RhoA。 有人做过相关的检测吗?这几种方法有缺点,或者说更科学合理的道理在何处?求解,谢谢
β和骨形成蛋白(BMP)家族各基因的熔解曲线,并且对PCR产物进行凝胶电泳实验,该家族的基因同源性很高。图4显示了BMP基因家族各基因扩增产物的熔解曲线和电泳结果。如图所示,各熔解曲线均为单峰,电泳条带亦单一,并且条带大小与预期值一致。结果表明, PCR 芯片扩增出基因产物特异性高,即使相同RNA样品中同一基因家族的同源基因也可以区别。优化的体系在SYBR Green检测中表现出高特异性,而这种特异性通常被认为只能在使用更加昂贵的基于探针的方法才能获得。 图4 PCR芯片的高特异性 RT
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