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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 供应商:
上海淳麦生物
- 适应物种:
人/大鼠/小鼠等各类物种
- 样本:
血清 细胞等
- 规格:
48T/96T
产品名称:IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒
用途
该试剂盒用于体外定量检测.血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP 管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器
IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒储存及有效期:
1、未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC,避免潮湿。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒标本的采集与保存:
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜,然后1000×g 离心20 分钟,取上清即
可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟,
取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:
1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后
再匀浆);
2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2 次)。
3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。
4、细胞裂解液:
1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);
2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):
i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。
4)将标本于2-8oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。
5、细胞培养上清或其它生物标本:请1000×g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保
存,但应避免反复冻融。
注意:
1、以上标本均需密封保存,4oC 保存应小于1 周,-20oC 不应超过1 个月,-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒操作步骤:
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1.Add 100 μL of standard or sample to each well. |
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2.Remove the liquid. |
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3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times. |
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4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times. |
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5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃. |
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6.Add 50 μL of Stop Solution. |
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7.Read the OD at 450 nm immediately. Calculation of the results. |
上海淳麦生物是专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材及实验仪器研发、销售、服务为一体的专业性生物科技公司。本着服务科学的理念,赛泓瑞建立了生命科学研究工具的研发、生产、销售及技术服务平台,现已有数万余种产品,并每年不断开发新产品,为广大的生命科学研究.员、医学、药学、农业、环保等的科研.员提供科研工具性产品及技术服务.
经营范围:ELISA试剂盒、原代细胞和细胞株、化学试剂、蛋白、抗体、分子试剂和试剂盒。
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文献和实验到的细胞类型表达FcR,同时反应抗体含有Fc段,都应该考虑进行Fc 阻断,来确保实验的特异性,减少非特异的产生。 那么,具体哪些细胞类型需要做Fc阻断? 首先,按FcR所结合的Ig种类不同可将其分为五类,即IgG(FcγR)、IgE(FcεR)、IgA(FcαR)、IgM(FcμR)和IgD(FcδR)。 IgG类型抗体的Fc受体是FcγR,依据和Fc片段亲和力的强弱,FcγR又可以被分为三个亚家族:FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)以及进一步还可以分为不同
生殖道和胃肠道的上皮下及皮肤下的结缔组织内靠近血管处。 膜分子: 1.FcεRⅠ(IgE的Fc受体); 2.C3aR 和 C5aR。 肥大细胞和嗜碱粒细胞活化方式: 1.IgE-Ag à 同FcεRⅠ交叉连接; 2.同过敏毒素C3a和C5a结合。 细胞活化产物: A.释放生物活性介质: 组胺(histamine);白三烯C4(leukotriene C4);前列腺素D2(prostaglandine D2
毒性 通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)杀伤靶细胞,IgG类抗体的Fab段与靶细胞表面抗原结合后,其Fc段可与NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞表面的FcrRIII结合,从而介导效应细胞杀伤携带特异性抗原的靶细胞,从而激活免疫细胞,例如自然杀伤细胞,巨噬细胞等,以及病毒、细菌感染的细胞。 6、参与超敏反应和自身免疫病 IgE为亲细胞抗体,可通过其Fc段与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的IgE高亲和力Fc受体结合,使其致敏。当相同的抗原再次进入机体时,可以直接与致敏原细胞表面的IgE结合
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