蛋白质组学分析：避免12个影响准确性错误

蛋白质组学分析涵盖蛋白质的鉴定、定量以及翻译后修饰分析。尽管高分辨率质谱和生物信息学工具的进步极大提升了分析的精确性，但实验流程中的一些常见错误仍可能影响数据的可靠性。本文总结了蛋白质组学分析中12个常见错误，并提供相应的解决方案，以提高实验的准确性和可重复性。

 

一、蛋白质组学分析之样品制备阶段的错误

1、样品降解

错误：长时间暴露于非最佳温度，导致蛋白质降解。

解决方案：

 

• 使用蛋白酶抑制剂，防止内源性蛋白酶降解目标蛋白。
• 采用快速冷冻（液氮速冻）并储存于 -80℃。
• 确保所有操作在低温条件（如冰上）下进行，以减少蛋白降解。

 

2、蛋白质浓度测定不准确

错误：使用不适合的定量方法，如在含有去污剂的样品中使用Bradford法。

解决方案：

 

• 根据样品成分选择合适的定量方法，如BCA法适用于含去污剂样品，而Bradford法适用于非去污剂环境。
• 确保使用标准曲线，并选择适当的蛋白标准品。

 

3、低质量的样品裂解

错误：裂解条件不足，导致蛋白质提取不完全。

解决方案：

 

• 选择适合样品类型的裂解缓冲液，如RIPA缓冲液适用于大多数细胞裂解。
• 结合超声破碎、机械匀浆和冻融循环等方法，提高蛋白提取效率。

 

二、蛋白质组学分析之蛋白质分离与消化阶段的错误

1、未充分去除杂质

错误：样品中盐或去污剂残留，干扰质谱分析。

解决方案：

 

• 通过透析、超滤或C18固相萃取（SPE）去除干扰物。
• 使用低盐缓冲液或挥发性试剂（如NH4HCO3）进行样品制备。

 

2、酶解效率低

错误：蛋白酶与底物比例过低或反应条件不佳，导致肽段覆盖率不足。

解决方案：优化酶解条件，如提高酶与蛋白质的比例（1:50-1:100）并确保适宜的温度（37℃）。

 

3、肽段过度修饰或降解

错误：样品长时间暴露于高温或碱性环境，导致脱酰胺或氧化修饰。

解决方案：

 

• 在避免长时间孵育的同时，加入抗氧化剂（如DTT）降低氧化修饰。
• 使用酸性溶液终止反应，减少非特异性修饰。

 

三、蛋白质组学分析之质谱分析阶段的错误

1、质谱仪校准不准确

错误：长期未校准，导致质量精度偏差。

解决方案：定期使用标准样品校准仪器，确保质量准确性。

 

2、数据采集参数不合理

错误：未针对样品特性优化MS/MS采集模式，导致低丰度蛋白识别率低。

解决方案：调整离子源参数，优化动态排除策略以提高低丰度蛋白检测率。

 

3、质谱数据的重复性差

错误：样品批次间存在系统误差。

解决方案：使用QC样品监测数据质量，并在实验前进行仪器性能评估。

 

四、蛋白质组学分析之数据分析与生物信息学处理错误

1、误用数据库搜索参数

错误：数据库搜索时未正确设置酶切规则或修饰类型。

解决方案：根据实验设计正确设置数据库搜索参数，如固定修饰（烷基化）和可变修饰（氧化、磷酸化）。

 

2、统计分析错误

错误：未进行适当的多重假设检验，导致假阳性率过高。

解决方案：采用适当的假发现率（FDR）控制方法，如Benjamini-Hochberg校正。

 

3、结果解释缺乏生物学验证

错误：仅依赖质谱数据，未结合其他实验进行验证。

解决方案：

 

• 结合Western Blot、qPCR等方法进行验证，提高结果可信度。
• 结合多组学数据（如转录组学、代谢组学）提高生物学解释能力。

 

蛋白质组学分析的高准确性和可靠性依赖于严谨的实验设计、优化的样品制备策略、精确的质谱分析参数以及严密的数据处理方法。通过避免以上12种常见错误，研究人员可以大幅提高实验结果的稳定性和可信度。百泰派克生物科技（BTP）提供全面的蛋白质组学分析服务，涵盖高分辨率质谱检测、数据分析及功能注释，助力科研人员获得高质量的研究数据。如需了解更多详情，欢迎联系我们！

 

百泰派克生物科技特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!