V型胶原酶

V 型胶原酶产品简介

胶原酶(Collagenase)是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别 Pro-X-Gly-Pro 序列 (该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中)并切割该序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly) 之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一 一种可以降解具有三股超 螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)，是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶(更 准确的称法为梭菌蛋白酶 A(clostridiopeptidase A)，能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他 的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白， 多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。该产品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿脑、 肺和许多其他上皮组织的解聚。它还被证明可有效用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质大鼠 肝细胞的分离以及肝细胞的制备。 胶原酶已用于研究晚期糖基化终产物所需的动脉组织的制备。该酶 已经测试可以约 1 mg/mL 的浓度释放肝细胞。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为五种类型：胶原酶 I 型，II 型，III 型，IV 型和Ⅴ型。

在应用上有所偏向：

(1)胶原酶 I(Type I Collagenase)：含有比较均匀的各种酶活力(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌 蛋白酶、胰蛋白酶活性),通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备;

(2)胶原酶 II(Type II Collagenase)：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、 胸腺和软骨等组织来源细胞的制备;

(3)胶原酶 III(Type III Collagenase)：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备;

(4)胶原酶 IV(Type IV Collagenase)：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维 持受体完整性的细胞制备实验。

本品为 V 型胶原酶， ≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units)，具有更高的胶 原酶活性和酪蛋白酶活性，更低的胰酶水平以降低对细胞膜蛋白的损伤，适用于胰腺小岛细胞和结缔 组织细胞的分离。

酶活力单位定义

在 37℃ , pH7.5 的条件下，5 h 内水解胶原产生相当于 1 µM L-亮氨酸的酶量定义为 1 个酶活力单 位。

V 型胶原酶使用说明

1.胶原酶储存液的配制

(1)向每管 100 mg 的胶原酶中加入 1 mL 的含 Ca2+ 、Mg2+的 HBSS(Hank ’s 平衡盐溶液，含 Ca2+、 Mg2+)，轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成 100 mg/mL(即 100×) 的储存液。

(2)用低蛋白结合性的0.22 μm 的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。

(3)使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL， 用于软骨消化的常用浓度为 1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所 需的最佳工作浓度。

2.组织的分离

(1)使用无菌手术刀或剪刀将组织切成 3-4 mm 大小的组织块;

(2)利用含 Ca2+ 、Mg2+的 HBSS 洗涤组织块数次;

(3)加入足量的含Ca2+ 、Mg2+的 HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度;

(4)于 37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用 3 mM 的 CaCl2 补充消化可以提高消化效率。

(5)已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量 的新鲜胶原酶工作液于 37℃继续孵育;

(6)利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次;

(7)细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

(8)于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3.器官灌注

(1)向 37℃预热的含 Ca2+、Mg2+的 HBSS 中加入胶原酶，另添加 3 mM 的 CaCl2 有助于提高分离效率;

(2)按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液;

(3)将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与 较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于 37℃进一步孵育;

(4)利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次;

(5)细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

(6)于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

注意事项

1.储存液-20℃避光冻存。

2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放 于普通住宅内。

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。