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- 华尔纳生物
- WN-26744
- 武汉
- 2025年07月13日
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- 文献和实验
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武汉华尔纳生物科技有限公司
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细胞代次低，活性高，品质保证，提供全程7*24小时专业技术指导售后服务 （养不活无理由全额退款）
类别 | 原代细胞 |
生长特性 | 贴壁生长 |
培养体系 | 兔胃平滑肌细胞完全培养基 |
传代方法 | 1：2，每2-3天换液一次 |
细胞形态 | 长梭形细胞，不规则细胞 |
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文献和实验一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平滑肌细胞。免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应。从细胞爬片HE染色和免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应中我们发现该方法所的膀胱平滑肌细胞
实验材料： 1. 正常大兔主动脉 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2 3. 消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%胶原酶Ⅰ 4. 细胞培养瓶（T25） 5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 6. 网筛（100目） 7. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 处死大兔，分离出主动脉，放入预冷的含双抗的1×PBS（pH=7.2）反复清洗3次。以洗去
，直到全部溶解，用 HCl 调节 PH 值到 7.4； 2.加 10 ml 10% 的 NP-40； 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠，搅拌，直到溶液澄清； 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA，用量筒定容到 100 ml，2～8 ℃ 保存； 5.理论上，蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入（抑蛋白酶肽，亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl；PMSF，Na3VO4，NaF 各 500 μl），但是 PMSF 在水溶液中很不稳定，30 分钟就会降解一半，所以 PMSF 应该
