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这些蛋白质互作实验方法，你都了解吗？

蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）对解析生命活动过程与疾病发生发展过程至关重要。随着时代发展，虽然大规模、高通量的生物学研究手段大大促进了蛋白质相互作用的预测，但这种预测还需要进一步利用体外和体内系统进行验证。分析蛋白质互作的方法多种多样，本篇文章为大家介绍以下几种互作分析技术： 免疫共沉淀 Co-IP 免疫沉淀 （IP）、免疫共沉淀 （Co-IP）和 pull-down 都是常用的从复杂的混合样品中获取目标分子，以进行下一步分析的方法，如检测蛋白质能否相互作用。在此类实验中，被研究的蛋白质称为

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）实验方法

基本实验步骤（1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清；（2） 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；（3）免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，protein A/G-beads用1ml

干货 | 蛋白质-DNA 互作研究那些你不知道的技术更迭!

[2] ✦ CUT&RUN 原理： 图 4：CUT&RUN 原理 [3] 利用连有刀豆蛋白 A 的磁珠（concanavalin A-coated magnetic beads）结合细胞。使用非离子去污剂洋地黄皂苷进行细胞膜通透。然后孵育靶蛋白（如转录因子, TF ）的抗体和 Protein A-MNase 。抗体和 Protein A-MNase 能够通过核孔进入细胞核，MNase 通过 Protein A 和抗体的介导切割靶蛋白附近的 DNA 序列。 MNase 的活化需要 Ca