- ￥38500
- 逸漠/IMMOCELL
- IMV-P001
- 厦门
- 2025年09月05日
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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 供应商：
厦门逸漠生物科技有限公司
- 规格：
1Kit
hPSC诱导分化胰腺类器官试剂盒产品描述
Cat NO:IMV-P001
本产品为hPSC诱导分化胰腺类器官试剂盒，人多能干细胞hPSC通过该试剂盒诱导分化可得到胰腺类器官，成熟后的胰腺类器官有类似腺泡、导管的结构。试剂盒可完成六孔板2个孔的hPSC的分化，最终获得约72个含胰腺类器官的基质胶滴。
本产品需要操作人员具有hPSC细胞培养经验，对类器官具有一定了解。
实验仪器、材料
仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱
材料：细胞培养板(规格为：6孔、12孔、24孔)、离心管(规格为15 mL 和 50 mL)、移液器(规格为 10 μL、100 μL、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL)、移液管(规格为10mL、50mL)
实验试剂
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研究阶段 |
产品货号 |
产品名称 |
产品规格 |
储存 |
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定形内胚层(DE)阶段 |
IMV-P01 |
基础培养基1 |
24mL |
-20℃，12个月 |
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IMV-P01-A |
补充剂A |
20μL |
-20℃，6个月 | |
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IMV-P01-B |
补充剂B |
80μL |
-20℃，6个月 | |
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前肠内胚层(AFE)阶段 |
IMV-P02 |
基础培养基2 |
12mL |
-20℃，12个月 |
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IMV-P02-C |
补充剂C |
60μL |
-20℃，6个月 | |
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胰腺内胚层(PE)阶段 |
IMV-P03 |
基础培养基3 |
24mL |
-20℃，6个月 |
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IMV-P03-D |
补充剂D |
40μL |
-20℃，6个月 | |
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胰腺祖细胞(PP)阶段 |
IMV-P04 |
基础培养基4 |
50mL |
-20℃，12个月 |
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IMV-P04-E |
补充剂E |
100μL |
-20℃，6个月 | |
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胰腺(3D)类器官分化阶段 |
IMV-P05 |
基础培养基5 |
40mL |
-20℃，12个月 |
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IMV-P05-F |
补充剂F |
40μL |
-20℃，6个月 | |
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胰腺(3D)类器官成熟阶段 |
IMV-P06 |
基础培养基6 |
200mL |
-20℃，12个月 |
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IMV-P06-G |
补充剂G |
200μL |
-20℃，6个月 | |
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Matrigel |
5mL |
-20℃，6个月 |
实验内容与方法
1、hPSC分化为内胚层细胞(DE)
(1)将6mL基础培养基1与20μL补充剂A、20μL补充剂B混合均匀，作为DE分化培养基1;将18mL基础培养基1与60μL补充剂B混合均匀，作为DE分化培养基2。
(2)当hPSC的汇合度达到75%-85%，吸去培养基，每孔加入2mL DE分化培养基1，记作D0，于37℃ 5%CO2培养箱中培养。
(3)第2天(D1)吸去培养基，每孔加入2mL DE分化培养基2，D2、D3每孔更换2mL DE分化培养基2，于37℃ 5%CO2培养箱中培养。
2、DE诱导分化为前肠内胚层细胞(AFE)
(1)将12mL基础培养基2与60μL补充剂C混合均匀，作为AFE分化培养基。
(2)D4、D5，每孔更换2mL AFE分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
3、AFE诱导分化为胰腺内胚层细胞(PE)
(1)将24mL基础培养基3与40μL补充剂D混合均匀，作为PE分化培养基。
(2)D6到D9，每天每孔更换2mL PE分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
4、PE诱导分化为胰腺祖细胞(PP)
(1)将50mL基础培养基4与100μL补充剂E混合均匀，作为PP分化培养基。
(2)D10、D11，每天每孔更换2mL PP分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
(3)D12，吸出培养基，用1 mL室温PBS(不含Ca2+/Mg2+)洗涤1次。
(4)每孔加入1mL恢复室温的Accutase并在37℃、5% CO2培养箱中孵育5 min;5min后每孔加入1mL恢复室温的DMEM/F12，轻轻吹打细胞，使细胞脱离孔底。
(5)将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
(6)仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL 室温PBS(不含Ca2+/Mg2+)重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。
(8)室温下以300 g离心5 min，吸弃上清，留20 μL细胞悬液，与预冷的基质胶混匀(6孔板一孔的细胞与180 μL Matrigel混合均匀，过程中避免产生气泡)。
(9)将200μL基质胶/细胞混合物按每孔30μL接种到24孔板中，即每个六孔板的细胞可以接种到24孔6个孔中。
(10)将板置于37℃、5%CO2培养箱中20-30分钟使基质胶凝固。
(11)每孔加入500μL PP分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
(12)D13，每孔更换500μL PP分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
5、PP进行胰腺(3D)类器官分化
(1)将40mL基础培养基5与40μL补充剂F混合均匀，作为胰腺(3D)类器官分化培养基。
(2)D14到D17，每天每孔更换500μL 胰腺(3D)类器官分化培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
6、胰腺(3D)类器官成熟
(1)将200mL基础培养基6与200μL补充剂G混合均匀，作为胰腺(3D)类器官成熟培养基。
(2)D18，每孔更换500μL 胰腺(3D)类器官成熟培养基，37℃ 5%CO2培养箱中培养。
(3)D21，预冷基质胶和枪头。
(4)吸去培养基，每孔加入1mL预冷的PBS(不含Ca2+/Mg2+)，吹打2-3次，收集到15mL离心管中。
(5)300g离心5min。
(6)吸去上清，加入1mL Accutase吹打2-3次，于37℃消化5min。
(7)消化完成后吹打4-5次，加入1mL DMEM/F12，继续吹打4-5次。
(8)300g离心5min，吸去上清。
(9)解冻的基质胶和细胞悬液放在冰盒上，用预冷枪头吸取180μL基质胶，与细胞悬液混匀，注意避免产生气泡。
(10)使用预冷枪头，按每孔30μL将含细胞的基质胶种到24孔板上，缓慢打入混合液时，逐渐向上移动枪头，使细胞均匀分布在胶中。
(11)将培养板放在培养箱中，20-30min，使胶滴凝固;
(12)小心沿孔壁加入500μL恢复室温的胰腺(3D)类器官成熟培养基，每隔1天换液。
(13)至D28，胰腺类器官成熟，即可进行鉴定和相关实验。
流程图及参考图片
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文献和实验Communications【4-5】和 Cells【6】发表的三篇文章，整理了人多能干细胞（hPSC）来源的胰岛样类器官培养方案。该培养过程遵循发育原理，由 hPSC 依次分化为定型内胚层 （DE）、胰腺祖细胞 （PP）、内分泌前体 （EP）， 最终诱导发育为人胰岛样类器官（human Islet-like Organoid, hILO）。 图 1. hPSC 来源细胞诱导成为胰岛样类器官的培养方案示意图【7】 细胞来源 hPSC 培养试剂配方 包被液 hPSC培养基 Day1 Day
酶及其作用 （5）主要实验流程 2.组织类型决定制备方案的差异 （1）方案差异化的决定因素 细胞外基质（ECM）的成分与密度：例如，纤维化肿瘤的胶原蛋白含量远高于脑组织。 细胞间连接的紧密程度：上皮组织的紧密连接比淋巴组织要牢固得多。 组织内源性酶的含量：胰腺等组织富含内源性蛋白酶，解离时易发生自溶。 目标细胞类型及其敏感性：神经元等细胞对酶解和机械力非常敏感，而肿瘤细胞通常较为耐受。 （2）一张表快速了解不同组织类型 神经组织的单细胞制备是所有组织类型中最具挑战性的领域
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