hPSC来源神经干/祖细胞(H9) iNSPC(H9)

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)基本信息

Cat NO: IMI-SP01H9

细胞名称： iNSPC(H9)，人胚胎干细胞来源神经干/祖细胞(H9)

种属来源：人

细胞来源：人胚胎干细胞(H9)

细胞形态：球形

生长特性：悬浮生长

培养基:：NSPC扩增培养基(含NSPC扩增基础培养基，货号IMI-SP01BM2;NSPC扩增培养基补充剂，货号IMI-SP01C)

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：500000 cells/mL 接种传代(约1:2至1:3)

冻存条件：神经细胞无血清冻存液(货号IMC-704)，液氮储存

支原体检测：无

规格：1×106 个细胞

 

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)培养操作

 

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)的低吸附六孔板(1孔)或低吸附35mm皿中培养过夜。24h后，100g离心弃去上清，换成不含Y-27632的NSPC扩增培养基，视培养基颜色或隔2天半量换液。

 

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)传代步骤

当神经球直径达100-150μm时，即可进行传代培养。

a、100g离心弃去上清，加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632)，置于37℃水浴消化10-15 min。

b、10-15 min后每孔加入等量 NSPC扩增培养基，轻轻吹打细胞，使细胞解离成小团块或单细胞。

c、将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。

d、仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的NSPC扩增培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

e、使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，使用NSPC扩增培养基稀释细胞，将细胞以5×105/mL(或1:2-1:3比例)接种到低吸附六孔板中。

 

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)冻存步骤

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面以低吸附T25为例;

a、收集hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)及细胞培养液，装入离心管中，100g离心5 min，弃上清液，加入2 mL Accutase(含10μM Y-27632)水浴消化15 min，。

b、根据细胞数量加入神经细胞无血清冻存液，使细胞密度1×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

 

hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)培养注意事项

1. 收到hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 客户可购买逸漠生物NSPC扩增培养基(含NSPC扩增基础培养基，货号IMI-SP01BM2;NSPC扩增培养基补充剂，货号IMI-SP01C)。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该hPSC来源神经干/祖细胞(H9)iNSPC(H9)仅供科研使用。

7. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

8. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者1个六孔板(或按照底面积换算)，必须使用低吸附培养器皿，或经过特殊液体润洗使得细胞难以贴于培养器皿表面。